[發(fā)明專利]一種組氨酸熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710036611.5
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106905418B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊弋;趙玉政;胡晗陽;顧燕芳;徐磊;陶榮坤
• 申請（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;C12N15/70;G01N21/64
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責(zé)任公司 31203
• 代理人: 程意意

1.一種組氨酸熒光探針，其特征在于，包括對組氨酸敏感的多肽B和熒光蛋白A；所述的熒光蛋白A插入到多肽B中，將多肽B分為多肽B1和多肽B2兩個(gè)部分，形成B1-A-B2式結(jié)構(gòu)的探針；

所述多肽B為HBP；

所述HBP的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述熒光蛋白A插入多肽B的插入位點(diǎn)為89/90，89/91，89/92，89/93，90/91，90/92，90/93，91/92，91/93，92/93。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組氨酸熒光探針，其特征在于，所述的熒光蛋白A為黃色熒光蛋白cpYFP，所述黃色熒光蛋白cpYFP的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組氨酸熒光探針，其特征在于，所述黃色熒光蛋白cpYFP替換為氨基酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.10所示綠色熒光蛋白cpGFP、氨基酸序列如SEQID NO.5或SEQ ID NO.11所示藍(lán)色熒光蛋白cpBFP、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示青色熒光蛋白cpTFP、氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示橘黃色熒光蛋白cpmOrange、氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示蘋果紅熒光蛋白cpmApple、氨基酸序列如SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.13所示紅色熒光蛋白cpmKate和氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示紅色熒光蛋白mcherry中的一種。

4.編碼權(quán)利要求1所述B1-A-B2式探針的核苷酸序列。

5.權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的組氨酸熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

1)將權(quán)利要求4所述的核苷酸序列與pRSETb載體連接，得到大腸桿菌重組表達(dá)載體；

2)將所述大腸桿菌重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中；

3)培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，分離得到組氨酸熒光探針。

6.一種包括權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的組氨酸熒光探針的組氨酸檢測試劑盒。

7.權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的組氨酸熒光探針或權(quán)利要求5所述的制備方法制備得到的組氨酸熒光探針在組氨酸實(shí)時(shí)定位、定量檢測以及高通量化合物篩選非疾病診斷或治療目的的應(yīng)用。