[發明專利]一種鑒定超級早稻中早39稻瘟病抗性基因的方法

有效

• 申請號: 201710036151.6
• 申請日: 2017-01-17
• 公開（公告）號: CN106755475B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 梁燕;季芝娟;曾宇翔;楊長登
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明公開了一種鑒定超級早稻中早39稻瘟病抗性基因的方法，包括以下步驟：稻瘟病接種鑒定；提取待檢測水稻樣本的DNA；對所提取的DNA進行PCR擴增；對PCR擴增產物進行測序，制備得到含有pid2等位基因的水稻樣本DNA序列；將pid2等位基因片段轉換為氨基酸序列，將pid2等位基因片段的氨基酸序列與參考氨基酸序列(PID2：ACR15163.1)進行比較；如果pid2等位基因的氨基酸系列具有一個非同義突變I441M，即其第441氨基酸由異亮氨酸突變為感病蛋白的甲硫氨酸，則該待檢測水稻樣本具有Pid2感病等位基因。結果表明，中早39包括其系譜中的供試材料均含有Pid2抗病等位基因。

技術領域

本發明屬于基因工程領域，具體地說，涉及一種鑒定超級早稻中早39稻瘟病抗性基因的方法。

背景技術

水稻是第一大糧食作物。近年來，隨著社會發展，農業種植結構的進一步調整，我國的糧食安全隱憂突出。常規早秈稻因其耐儲存、用途廣泛、商品性好等特點，特別是作為工業用糧的作用大大增加，是我國糧食安全的重要支撐。常規超級早秈稻品種中早39因其具有高產優質和高抗稻瘟病的特點，連續6年被農業部推薦為超級稻示范推廣品種，最近幾年一直被作為浙江省早稻區試的對照材料。2013年中早39連創兩項浙江農業水稻高產吉尼斯紀錄，成為浙江省早稻種植面積最大的品種。中早39作為骨干親本廣泛應用于早稻育種中，由中早39配制的后代材料“株兩優39”也于2014年通過了國家審定。中早39作為超級早稻品種不僅表現出常年高產，生育期適中，適于多種栽培模式，而且高抗稻瘟病。在2008-2009年浙江省早稻區域試驗中，中早39的稻瘟病抗性為抗或高抗。近幾年中早39作為浙江省早稻區域試驗對照品種其抗瘟性鑒定結果為高抗或抗。前期發明中我們采用來自全國12個省市的146個菌株對中早39進行了稻瘟病抗譜測定，結果表明中早39對秈型小種的平均抗譜為82.9％，對粳型小種的平均抗譜為71.2％。中早39對不同省市的稻瘟病菌株的抗譜是不一致的，對浙江、貴州和廣西的菌株抗譜分別為92.9％、93.1％和100％，說明中早39在這3個省份可以作為稻瘟病抗性育種的抗源使用，為中早39的區域推廣提供了理論參考依據。

抗病基因是抗性育種的基礎。鑒定、定位和克隆廣譜抗稻瘟病基因，對深入理解水稻廣譜抗病的分子機制，培育廣譜和持久抗病品種，持續有效控制稻瘟病具有重要意義。目前水稻品種稻瘟病抗性改良，采取的主要方法是將待改良材料與抗病材料雜交后回交，并通過系統選育和抗性鑒定篩選抗病后代。然而，對抗病材料中含有的抗性基因和這些抗性基因對生產上流行的菌株的抗病能力等認識的匱乏，造成抗病親本的選擇具有較強的盲目性，這進一步影響了抗病育種的效率和成效。盡管中早39自審定以來，在推廣過程中表現出較強的稻瘟病抗性，然而，結合“基因對基因假說”和田間育種實踐，新的致病性強的稻瘟病流行生理小種克服中早39稻瘟病抗性的風險依然存在，而且隨著中早39推廣時間的延長，這種風險越來越高。因此，鑒定中早39中的稻瘟病抗病基因有利于明確中早39的稻瘟病抗性基礎，為進一步的抗性育種利用提供理論依據。

發明內容

有鑒于此，本發明針對上述的問題，提供了一種鑒定超級早稻中早39稻瘟病抗性基因的方法。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種鑒定超級早稻中早39稻瘟病抗性的方法，包括下述步驟：

1)用侵染中早39的稻瘟病菌株接種地谷B、中早39及其系譜中的水稻品種；

2)提取待檢測水稻樣本的DNA；

3)利用pid2引物對所提取的DNA進行PCR擴增；

4)對PCR擴增產物進行測序，并將測序后的DNA序列經BioEdit軟件人工校對和手工修改，并完成序列拼接，制備得到含有pid2等位基因的水稻樣本DNA序列；將pid2等位基因片段轉換為氨基酸序列；

5)結果判讀：

將pid2等位基因片段的氨基酸序列與參考氨基酸序列(PID2：ACR15163.1)進行比較；