[發明專利]一種重組牛粒細胞集落刺激因子工程菌的高密度發酵方法

在審

• 申請號: 201710034661.X
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106995793A
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 孫珊珊;王建;程雪嬌;王宇鵬;李麗琴;朱士江;楊雪;王猛;于小婷;姬榮曼;杜寧寧;焦曉軍;余貴菊;甄盼盼;姜淋潔;張立會;王勇;崔志剛
• 申請（專利權）人: 天津市中升挑戰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 天津創智天誠知識產權代理事務所(普通合伙)12214
• 代理人: 陳昌娟

技術領域

本發明涉及微生物發酵領域，特別涉及一種牛粒細胞集落刺激因子工程菌的高密度發酵方法。

背景技術

隨著分子生物學技術的迅速發展，許多有重要應用價值卻又難以直接合成的蛋白質已經在多種表達系統中得到表達。在眾多的基因工程表達系統中，由于大腸桿菌(Escherichia coli)結構簡單、遺傳學背景清晰、容易培養、生長周期短，生長條件清楚，成為最常用的宿主菌，目前已成為最為常用的原核表達系統，許多有價值的重組蛋白都在大腸桿菌中獲得了表達。

利用一般的發酵工藝生產大腸桿菌或以其構建的基因工程菌的表達產物，大腸桿菌的生物量、蛋白表達量、代謝產物在菌體內和發酵液中的濃度都比較低，難以獲得理想的生產效率。近年來，隨著大腸桿菌基因重組技術與大腸桿菌高密度發酵技術的結合，使得原來無法獲得的許多天然蛋白能夠大量生產，如集落刺激因子、干擾素、氨基酸等的生產。

高細胞密度發酵(high cell density cultivation，HCDC)是指在一定條件和培養體系下，獲得最多的細胞量，由此更多地或更高效地獲得目的產物。即利用一定的培養技術和裝置提高菌體的發酵密度，使菌體密度較普通培養有顯著提高，最終提高產物的比生產率(單位體積單位時間內產物的產量)。實現高密度發酵不僅可以減少培養體積，強化下游分離提取，還可以縮短生產周期、減少設備投資，從而降低生產成本。

重組大腸桿菌進行高密度發酵可獲得較高的生物量，但對發酵條件有非常高的要求。影響高密度發酵的因素非常多，如細胞生長所需要的營養物質、發酵過程中生長抑制物的積累、溶氧濃度、培養溫度、誘導方式、發酵液的pH值、補料方式及發酵液流變學特性等。

因此，對于重組大腸桿菌的發酵方法存在進一步的改進和優化需求，這也是該技術領域內的研究熱點和重點之一，更是本發明得以完成的動力和出發點所在。

發明內容

本發明針對現有技術的問題，提供了一種高表達量、高菌體密度的重組大腸桿菌發酵方法，并且提供了一種適用于該發酵方法的發酵培養基。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種重組牛粒細胞集落刺激因子工程菌發酵培養基，由以下組分組成：

葡萄糖8～15g/L、胰化蛋白胨15～25g/L、酵母提取物10～15g/L、 KH₂PO₄ 2～4g/L、K₂HPO₄ 5～8g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 6～8g/L、(NH₄)₂SO₄ 2～4g/L、NH₄Cl 0.1～0.3g/L、MgSO₄·7H₂O 1.0～1.5g/L、微量元素5～10ml/L 及消泡劑0.5～1ml/L，所述微量元素成分為：MnSO₄·5H₂O 0.3～0.5g/L、 ZnCl₂0.5～1g/L、CoCl₂·6H₂O 1～2g/L、Na₂MO₄·2H₂O 0.5～1g/L、CuSO₄·5H₂O 1～1.85g/L、FeSO₄·7H₂O 5～10g/L、H₃BO₃0.3～0.5g/L、CaCl₂·2H₂O 5～10g/L。