[發(fā)明專利]一種葵花組培育苗方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710034293.9
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN107047295A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戚永奎;葛兆建;楊小蘭;沈羊城;朱明;陳永紅;紀(jì)煒;陳建平;唐伯平;葛漢勤
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所;鹽城師范學(xué)院;鹽城昕宇農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司32206
• 代理人: 顧進(jìn)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)及栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種葵花組培育苗方法。

背景技術(shù)

向日葵(Helianthus anuus L. )是菊科( Compositae)向日葵屬(Helianthus )栽培種, 起源于北美西南部，向日葵大約在16 世紀(jì)末或17世紀(jì)初傳入我國，長期以來，向日葵在我國只是零星種植主要作為干果食用，20世紀(jì)90年代以來逐步成為我國人民的飲食結(jié)構(gòu)中是食用油的主要來源之一，19世紀(jì)80年代初，葵花開始在歐洲被用作為觀賞植物，目前已有100多年的栽培歷史，從上世紀(jì)80年代初，人們開始進(jìn)行向日葵組織培養(yǎng)研究，直到現(xiàn)在，向日葵離體培養(yǎng)植株再生仍然十分困難，即使能再生重復(fù)性也特別差，向日葵的再生途徑主要通過器官發(fā)生和胚胎發(fā)生而產(chǎn)生，向日葵的器官培養(yǎng)從子葉開始到下胚軸、真葉、莖尖等都不同程度的得到了再生植株，這幾種外植體中子葉、下胚軸、莖尖較易誘導(dǎo)出再生植株，但是總體上誘導(dǎo)出芽的頻率不高，一般在2．5％～12％，而且受各種因素影響，芽不易長成植株。向日葵胚胎培養(yǎng)可以克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性、縮短雜交育種世代周期、加快育種進(jìn)程。

《華北農(nóng)學(xué)報(bào)》1993年第8卷第2期中《向日葵未成熟胚培養(yǎng)中不定芽的發(fā)生》一文中對向日葵未成熟胚不定芽發(fā)生進(jìn)行了研究表明，自交系、雜交一代和保持系的再生頻率高于普通品種。《內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2003年第18卷第5期中《向日葵未成熟胚組織培養(yǎng)及再生芽的研究》一文中對未成熟胚的萌動(dòng)、愈傷組織的誘導(dǎo)、分化及再生苗的培養(yǎng)和移栽等方面進(jìn)行了研究表明，授粉后10-12天的胚分化成苗率可達(dá)73％以上。

江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所從2011年開始從事葵花新品種選育研究，經(jīng)過多年的選育，目前已經(jīng)培育出多個(gè)具有不同特色的觀賞葵花新品系，實(shí)踐表明單瓣多頭葵花容易通過種子繁殖培育性狀穩(wěn)定的自交系，但是對于重瓣多頭葵花（黃色單瓣多頭葵花、紫色重瓣多頭葵花、白色重瓣多頭葵花），應(yīng)用種子繁殖，種子結(jié)實(shí)率低，后代性狀穩(wěn)定困難，分離嚴(yán)重。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為克服重瓣多頭葵花品種（黃色重瓣多頭葵花、紫色重瓣多頭葵花、白色重瓣多頭葵花）應(yīng)用種子繁殖困難，種子結(jié)實(shí)率低，后代性狀難以穩(wěn)定，分離嚴(yán)重的問題，提出一種以腋芽作為外植體培育向日葵組培苗的方法，并建立了葵花離體培養(yǎng)再生體系。

為解決上述問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種葵花組培育苗方法，以葵花的腋芽為外植體，通過組織培養(yǎng)培育葵花苗。

優(yōu)選地，所述組培育苗方法包括以下步驟：

A.外植體的選擇：采集頂花以下葉腋中的腋芽，腋芽的大小不超過1cm；

B.外植體準(zhǔn)備：將外植體洗凈并消毒滅菌，然后切取5mm左右大小腋芽的頂部作為外植體接種于分化培養(yǎng)基上；

C.誘導(dǎo)和分化：外植體繼續(xù)培養(yǎng)直接分化成不定芽；

D.壯苗培養(yǎng)：不定芽生長到2～3cm時(shí)轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

E.生根培養(yǎng)：不定芽生長到4～5cm時(shí)轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

F.組培苗馴化：組培苗長大發(fā)生4～5 片葉子，5～6 條白色粗壯的幼根長達(dá)約1～2 cm 時(shí)，出瓶鍛煉移栽。

優(yōu)選地，所述組培育苗方法，步驟A所述頂花選自具有觀賞價(jià)值的分枝多的品種。

優(yōu)選地，所述組培育苗方法，步驟A所述腋芽選自頂花即將開放或者已經(jīng)開放，容易辨別出花型一致、腋芽生長慢、其它性狀一致的植株。

優(yōu)選地，所述組培育苗方法，

所述步驟B中，外植體用洗潔凈洗滌，然后用清水沖洗0.5h,在超凈工作臺(tái)上，先用70%的乙醇浸泡30～60s，然后用10%的過氧化氫或3%的次氯酸鈉溶液消毒15～20min，用無菌水清洗3～4 次；所述分化培養(yǎng)基為：MS + 0.6～1.5 mg/L 6-BA + 0.03mg/L NAA培養(yǎng)基；其中，6-BA濃度為1.2 mg/L為最優(yōu)，分化率達(dá)到83.5%以上；

所述步驟C中，外植體在培養(yǎng)25～30天直接分化成不定芽，繼續(xù)培養(yǎng)10～15天當(dāng)不定芽生長到2～3cm時(shí)轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基；所述外植體的培養(yǎng)條件為：在溫度25～28℃，光照1600lx，日光燈每天光照12h的組織培養(yǎng)室中培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基含7.5g/L 瓊脂，滅菌前調(diào)pH為 5.8～6.0；

所述步驟D中，所述壯苗培養(yǎng)基為：MS + 0.3～0.8 mg/L 6-BA + 0.03 mg/L NAA培養(yǎng)基；其中，6-BA濃度為0.6mg/L為最優(yōu)；培養(yǎng)周期為25～30天；