[發明專利]一種避免污染的稻曲病菌薄壁分生孢子的制備培養方法

在審

• 申請號: 201710033965.4
• 申請日: 2017-01-10
• 公開（公告）號: CN106635948A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 張君成;蒲相君;熊英
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種避免污染的稻曲病菌薄壁分生孢子的制備培養方法，其特征在于，制備培養方法的步驟如下：

1)采用普通三角瓶作制備培養孢子的器具，將三角瓶潔凈備用；

2)基底培養基的制備及空白三角瓶的滅菌：按配比為：馬鈴薯100g、瓊脂20g、水900mL，制備基底培養基，并分裝入步驟1)準備的三角瓶；另取步驟1)準備的三角瓶直接套瓶塞成空白三角瓶；然后把基底培養基與空白三角瓶一起進行常規高壓高溫滅菌，備用；

3)核糖的非高溫滅菌：按配比為：核糖10g、水100mL，用清水將核糖配成核糖溶液，在無菌條件下用細菌過濾器將該核糖溶液進行過濾滅菌，備用；

4)馬鈴薯核糖瓶式培養基的配備：將步驟2)制備的基底培養基加熱熔化，水浴平衡至60℃，同時將步驟3)過濾滅菌的核糖溶液在水浴中平衡至60℃，然后將二者同時轉移到超凈工作臺無菌環境中，按體積比例：基底培養基/核糖溶液＝9/1，將基底培養基與核糖溶液混合，形成實際配比為：馬鈴薯100g、核糖10g、瓊脂20g、水1000mL的馬鈴薯核糖培養基，混合搖動均勻后，分裝入步驟2準備的滅菌空白三角瓶，形成瓶式產孢培養基；

5)母代稻曲病菌的移植：以實驗室已有的稻曲病菌分生孢子液作母代菌體，用移液器將該母代孢子液移植入步驟4)制備的瓶式產孢培養基，并使孢子液在培養基面上分散均勻；

6)產孢培養：將步驟5)操作完備后的瓶式產孢培養基轉入溫度為28℃的普通培養箱內培養；

7)新一代孢子的收集：通常步驟6)培養5天后，培養基面上已形成大量的微小菌落，菌落上形成大量的分生孢子；用無菌水洗脫菌落上的孢子，并集中到滅菌容器內，即獲得無雜菌污染的較高質量的稻曲病菌薄壁分生孢子液。