[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗癌活性肽變體及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710033693.8
• 申請(qǐng)日: 2017-01-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106831970A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李露青
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 李露青
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及抗癌活性肽變體。

背景技術(shù)

多肽抗癌藥物是近年來(lái)抗癌藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。現(xiàn)有技術(shù)中，專(zhuān)利申請(qǐng)ZL200710035478.8從新疆穴居狼蛛粗毒中分離純化獲得的抗癌活性肽，為24肽。這種多肽能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺滅多種癌細(xì)胞，并能抑制癌細(xì)胞增殖，但對(duì)正常細(xì)胞和動(dòng)物毒性較弱；同時(shí)還可抑制低氧誘導(dǎo)因子HIFα轉(zhuǎn)錄活性，從而抑制腫瘤組織血管再生，有效的抑制實(shí)體瘤生長(zhǎng)；其抗癌活性具有高效低毒的特點(diǎn)，對(duì)于開(kāi)發(fā)治療肺癌、肝癌、子宮頸癌等實(shí)體瘤的藥物有著較好的應(yīng)用前景。

現(xiàn)有技術(shù)中，為了提高多肽的活性，針對(duì)多肽序列進(jìn)行特異性的改變，從而尋找活性更高的變體是常規(guī)的做法。為了進(jìn)一步提高該多肽的生物活性，申請(qǐng)人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，針對(duì)該申請(qǐng)獲得的多肽進(jìn)行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的變體。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及的多肽，序列如下:

NB：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL；

(NB1)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB 2)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 3)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLSS；

(NB 4)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKEKEHLS；

(NB 5)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB 6)：SRKGSFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB 7)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB 8)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB 9)：RKGWAKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB 10)：RKGWAKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB 11)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB 12)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 13)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 14)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

對(duì)照1：RKGWFKAMKSWAKFIAKEKLKEHL；

對(duì)照2：RKGWSKAMKSIAKFIAKEKLKEHL。

本發(fā)明的多肽合成后，可以做成游離態(tài)形式，也可以做成陽(yáng)離子鹽，如：TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。

本發(fā)明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治療。這些藥物劑型涵蓋：注射溶液、片劑、霜?jiǎng)⒛z囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。劑量?jī)?yōu)選在10-5～10-2mg/kg體重的范圍內(nèi)，以0.1％-0.5％的較高濃度全身或局部給藥。對(duì)于具體治療的最佳劑量的確定是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：本發(fā)明多肽的人工化學(xué)合成

通過(guò)常規(guī)的合成方法，合成了本發(fā)明多肽，經(jīng)質(zhì)譜鑒定顯示純度較高，與設(shè)定序列的多肽分子結(jié)構(gòu)相同。

實(shí)施例2：多肽殺滅癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

通過(guò)MTT分析法測(cè)定了本發(fā)明多肽對(duì)Hela、CNE1和JB6 3種細(xì)胞株的毒性。作用濃度為40微摩爾本發(fā)明多肽。為了進(jìn)一步驗(yàn)證，采用溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)本發(fā)明多肽對(duì)于正常細(xì)胞的毒性，結(jié)果顯示200微摩爾本發(fā)明多肽只能裂解約15％的紅細(xì)胞，說(shuō)明本發(fā)明多肽對(duì)于正常細(xì)胞毒性較弱。在整體動(dòng)物水平，我們也檢測(cè)了本發(fā)明多肽的毒性，以200毫克/kg體重皮下注射小鼠沒(méi)有出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)(48小時(shí)內(nèi))，表明本發(fā)明多肽毒性較低，對(duì)于癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的選擇性。

采用Annexin V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶雙染法檢測(cè)了本發(fā)明多肽殺滅癌細(xì)胞的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明多肽可誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡，未經(jīng)藥物處理的Hela細(xì)胞凋亡較少，說(shuō)明本發(fā)明多肽通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡殺滅癌細(xì)胞。

本發(fā)明多肽對(duì)3中細(xì)胞株的殺滅結(jié)果

實(shí)施例3本發(fā)明多肽抑制裸鼠荷瘤生長(zhǎng)