[發明專利]一種溶藻細菌微球的固定化制備和應用

在審

• 申請號: 201710033658.6
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106701630A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 梁文艷;張恒峰;王媛媛;樊乾龍
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N11/08;C12N11/10;A01N63/00;A01P13/00;C12R1/01;C12R1/05
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種溶藻細菌微球的固定化制備和應用，其特征在于，包括以下步驟：

（1）配制無菌液體培養基；

（2）將溶藻細菌接種于步驟（1）溶液中，培養，得到培養菌液；

（3）將步驟（2）培養菌液中的菌體細胞分離，并重懸于溶液（1）中；

（4）配制聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液；

（5）配制氯化鈣-硼酸交聯劑；

（6）將步驟（4）中溶液與步驟（3）中菌液混合，滴加入步驟（5）溶液中，固定化交聯得到溶藻細菌微球。

2.如權利要求1所述的方法，步驟（1）中培養基為牛肉膏蛋白胨培養基，組成為：氯化鈉5g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L，配制于蒸餾水中，pH值為7.2-7.5。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中溶藻細菌為缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，CGMCC No.11571）、短波單胞菌（Brevundimonas olei，CGMCC No.11572）、黏著劍菌（Ensifer adhaerens，CGMCC No.12458）和糞產堿菌（Alcaligenes faecalis，CGMCC No.12457），培養溫度為28-37℃下，培養時間為48-96小時，優選60-80小時。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）中菌液分離后所獲得的菌體細胞重懸于原取樣體積20-80%的培養基中，優選40-60%。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）中聚乙烯醇的質量濃度為10-12%，海藻酸鈉質量濃度為0.25-1.0%，先在蒸餾水中加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在80-90℃下溶解，并保持溶液最終溫度為25-40℃。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（5）中，用質量濃度15-30%碳酸鈉溶液調節硼酸飽和溶液pH值為6.7-7.2，加入氯化鈣，使其質量濃度為1.5-2.5%。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（6）中聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液的體積比2:1-1:1，在35-40℃下攪拌均勻，并在4℃下固定化交聯16-32小時，優選20-24小時。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述藻類為藍藻中的微囊藻屬，優選銅綠微囊藻、中華微囊藻、水華微囊藻、放射微囊藻、堅實微囊藻、魚害微囊藻、挪氏微囊藻、假絲微囊藻、史密斯微囊藻、綠色微囊藻、惠氏微囊藻。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，使用時，將溶藻細菌微球填充于鏤空容器中，直接投放于含藻水體中。