[發明專利]一種灰霉病菌實驗室材料的常備形態及其制備與應用方法

在審

• 申請號: 201710033579.5
• 申請日: 2017-01-10
• 公開（公告）號: CN106635841A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 張君成;曾東強;楊平
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種灰霉病菌實驗室材料的常備形態，其特征在于，用灰霉病菌的分生孢子作日常工作的常備形態；分生孢子純凈無污染；分生孢子存放于無菌水中；分生孢子暫停生長發育，但轉到培養基上能馬上恢復正常生長發育。

2.如權利要求1所述的一種灰霉病菌實驗室材料的常備形態的制備與應用方法，其特征在于，制備和應用方法步驟如下：

1)分生孢子的制備培養：用三角瓶作培養器具，裝盛馬鈴薯葡萄糖培養基作產孢培養基，該培養基的組分配比為：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000mL；將灰霉病菌的菌絲體移植入三角瓶內的產孢培養基上，在合適的溫度下培養，直到培養基面上形成菌落和分生孢子；

2)灰霉病菌材料常備形態的制備：取無菌水注入步驟1)培養獲得的產孢菌落上，輕輕洗脫菌落上的孢子，獲得含有菌絲碎段的孢子液；用滅菌紗布過濾去除該孢子液中的菌絲碎段；將該孢子液進行離心沉淀，倒掉上清液，除去孢子液中混雜的菌體代謝產物和培養基組分；剩下的沉淀為純凈的分生孢子；以該純凈分生孢子作為灰霉病菌材料的常備形態；用無菌水將沉淀孢子懸浮，攪動使孢子充分分散，獲得灰霉病菌材料的常備孢子液；

3)灰霉病菌材料常備形態的孢子含量標定：用無菌水將步驟2)獲得的常備孢子液的孢子濃度，調配為10⁶孢子/mL；

4)灰霉病菌材料常備形態的日常存放：在無菌條件下，將步驟3)標定的常備孢子液分裝到有蓋密閉的滅菌容器內，并轉移到20℃的暗環境中存放備用；

5)灰霉病菌材料常備形態的應用：將步驟4)存放的灰霉病菌材料常備孢子液轉到超凈工作臺，振蕩裝存常備孢子液的容器，使分生孢子充分懸浮和分散；開蓋后用移液器定量吸取孢子液，移植到相關的工作環節或實驗程序中；吸液移植操作完畢后回蓋密封，將剩余的常備孢子液轉回步驟4)的存放處存放。