[發明專利]文蛤多巴脫羧酶基因及其編碼蛋白和應用

有效

• 申請號: 201710032506.4
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN106755021B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 岳欣;劉保忠;張淑靜;聶慶;王鴻霞
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;A61K38/51;A61P37/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎;周秀梅

本發明涉及分子生物學和生物工程技術領域，具體的說是一種文蛤多巴脫羧酶基因及其編碼蛋白和應用。本發明從文蛤中克隆了多巴脫羧酶cDNA全長序列并原核重組表達了該蛋白，文蛤多巴脫羧酶基因cDNA全長具有序列SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列，其編碼的蛋白具有SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列，獲得的重組多巴脫羧酶具有較高酶活性，具有大規模生產的可能，可以彌補天然蛋白量低以致難以滿足需要的局限。鑒于多巴脫羧酶在醫藥及貝類免疫等領域中的重要作用，本發明所介紹的文蛤多巴脫羧酶基因及其編碼蛋白具有在醫藥等其他相關領域的應用前景，同時可以作為備選的水產養殖貝類新型免疫增強劑。

技術領域

本發明涉及分子生物學和生物工程技術領域，具體的說是一種文蛤多巴脫羧酶基因及其編碼蛋白和應用。

背景技術

多巴脫羧酶是氨基酸脫羧酶的一種，又稱色氨酸脫羧酶，可通過催化L-3，4-二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)和L-5-羥色氨酸脫羧合成具有重要生理活性的神經遞質多巴胺和5-羥色胺，同時還可催化部分芳香氨基酸脫羧生成對應的生物胺。腦內5-羥色胺含量降低將導致抑郁等常見心境障礙；黑質和紋狀體病變致使多巴胺合成減少還可導致帕金森癥發生。除了抑郁和帕金森癥，多巴脫羧酶還和高血壓、失眠、厭食等疾病相關。同時，多巴脫羧酶通過參與兒茶酚胺能神經內分泌免疫調節系統及黑化作用，影響機體的免疫應答，已有報道指出其參與脊椎動物、無脊椎動物、植物的免疫應答，增強機體針對病原的抗性。另外，多巴脫羧酶在植物生長素合成和器官發育過程中發揮重要作用。

多巴脫羧酶的重要作用使其具有廣泛的應用價值。重組多巴脫羧酶已作為大批量篩選其抑制劑的靶標，從而應用于臨床治療。文蛤是一種在沿海和灘涂地區廣泛分布的雙殼貝類，在我國沿海，文蛤作為一種重要的經濟貝類而被廣泛養殖。目前，還沒有從文蛤中獲得多巴脫羧酶基因的報道。

發明內容

本發明的目的是一種文蛤多巴脫羧酶基因及其編碼蛋白和應用。

為實現上述目的，本發明采用技術方案為：

一種文蛤多巴脫羧酶基因，其是通過cDNA文庫結合RACE技術從文蛤中克隆得到的多巴脫羧酶的cDNA序列，該序列全長1930bp，其中編碼框1599bp，具體為SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列。

所述文蛤多巴脫羧酶基因所編碼的蛋白共包含533個氨基酸，具體為SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列。

一種文蛤多巴脫羧酶體外重組表達方法，具體步驟為：通過PCR技術，擴增編碼文蛤多巴脫羧酶的基因片段并將其克隆到pGEX-4T-1表達載體中，在IPTG誘導條件下，在大腸桿菌中重組表達該蛋白，重組產物經過GSTrap FF親和柱純化，獲得含SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列生物多巴脫羧酶重組蛋白。

一種文蛤多巴脫羧酶基因的應用，經檢測所重組的蛋白具有多巴脫羧酶活性，同時重組蛋白能夠降低弧菌感染文蛤中弧菌菌落數，可以作為備選的貝類免疫增強劑。

本發明所具有的優點：

本發明從文蛤中克隆了多巴脫羧酶cDNA全長序列并原核重組表達了該蛋白，重組蛋白具有多巴脫羧酶活性，能夠降低弧菌感染文蛤中弧菌菌落數，可以作為備選的貝類免疫增強劑，同時也具有在醫藥等其他相關領域的應用前景。本發明重組蛋白具有大規模生產的可能，可以彌補天然蛋白量低以致難以滿足需要的局限。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的純化的文蛤多巴脫羧酶重組蛋白；其中，M：蛋白marker；1：IPTG誘導前總蛋白；2：IPTG誘導后總蛋白；3：親和柱純化后的文蛤多巴脫羧酶-GST重組融合蛋白。

圖2為本發明實施例提供的弧菌感染文蛤血淋巴中的弧菌菌落數；其中，1：注射重組多巴脫羧酶的文蛤血淋巴涂板；2：注射PBS的文蛤血淋巴涂板。

具體實施方式