[發明專利]GSK503在制備治療視網膜母細胞瘤藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710031936.4
• 申請日: 2017-01-17
• 公開（公告）號: CN106692152A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 范先群;張赫;文旭洋;柴佩韋;葛盛芳;賈仁兵
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: A61K31/496
• 分類號: A61K31/496;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于視網膜母細胞瘤的治療領域，特別涉及一種GSK503在制備治療視網膜母細胞瘤藥物中的應用。

背景技術

視網膜母細胞瘤(Retinoblastoma，RB)是兒童最常見的眼內惡性腫瘤，常在發育過程中發生發展，是一種起源于視網膜核層的胚胎性惡性腫瘤。該腫瘤具有家族遺傳傾向，是嬰幼兒眼病中性質最嚴重、危害性最大的一種惡性腫瘤，其視覺預后較差，且容易發生顱內及遠處轉移，常危及患者生命。

目前，針對該腫瘤的治療主要為手術和放化療等非病因治療，缺乏針對其病因的治療手段。Zeste基因增強子同源物2(EZH2)為多梳蛋白復合體(PcG)家族的成員之一，是多梳蛋白抑制復合體2(PRC2)的催化活性亞單位。EZH2是細胞內的一種組蛋白甲基轉移酶，它可促進細胞內組蛋白H3的第27個氨基酸上三甲基(H3K27me3)的甲基化，并被證明是一種原癌基因，與多種腫瘤的生長和轉移相關。EZH2可通過提高細胞中H3K27me3甲基化水平，抑制抑癌基因表達，從而導致腫瘤發生。GSK503是一種新型的EZH2小分子抑制劑，它被證實在皮膚惡性黑色素瘤中可顯著抑制腫瘤的生長和轉移，并對正常黑色素細胞無顯著影響，因而被認為對腫瘤治療有較好的前景。但迄今為止，尚沒有GSK503在視網膜母細胞瘤中應用的報道，其對視網膜母細胞瘤的療效和作用機制尚不清楚。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種GSK503在制備治療視網膜母細胞瘤藥物中的應用，該發明旨在為視網膜母細胞瘤的臨床治療提供新的靶點和治療藥物，提高治療有效性，降低眼球摘除率，提高患者視覺預后。

本發明的GSK503在制備治療視網膜母細胞瘤藥物中的應用，化學結構式如式I所示，

優選地，所述的藥物中GSK503終濃度大于或等于1μM。

優選地，所述的藥物中GSK503終濃度為1-10μM。

優選地，所述的藥物中GSK503終濃度為1、5或10μM。

GSK503是一種新型的EZH2小分子抑制劑，分子式為C₃₁H₃₈N₆O₂，分子量526.67g/mol,分子結構式(如式I所示)。申請者實驗發現，GSK503能顯著抑制視網膜母細胞瘤的生長，通過抑制EZH2，使細胞內H3K27me3甲基化程度降低，從而使抑癌基因重新表達，達到抑制腫瘤生長的效果。

有益效果：

GSK503終濃度達到1μM即可達到有效的治療濃度，且藥物作用效果隨著濃度升高而增加，可顯著抑制視網膜母細胞瘤生長。

附圖說明

圖1為將RB組織與眼正常組織進行免疫熒光的實驗結果圖。

圖2為染色質免疫沉淀實驗結果圖，其中A為RB44對照細胞及與GS503處理的RB44細胞對比的染色質免疫沉淀PCR結果圖，B為A圖的定量分析結果圖。

圖3為RB44細胞在不同終濃度GS503處理后的增殖實驗結果圖。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

實施例1

免疫熒光實驗

實驗材料：視網膜母細胞瘤組織芯片(含28例視網膜母細胞瘤組織，12例眼正常組織)，購自西安艾麗生物科技有限公司；H3K27me3抗體及第二抗體，購自Abcam(艾博抗(上海)貿易有限公司)。

將組織芯片置于濕盒內，鋪加PBS于組織芯片上。稀釋的H3K27me3抗體于4℃，13500g離心2min。在組織芯片的一端吸去玻片上的PBS緩沖液，并從另一端加上抗體，蓋上加濕盒，室溫溫育1h。以PBS冼玻片3次(5min/次)，從切片一端加入新的PBS緩沖液，由另一端吸去舊的緩沖液。稀釋的第二抗體于4℃，13500g離心2min。將第二抗體加于組織芯片上，置加濕盒中室溫溫育1h，以PBS洗玻片3次(5min/次)。蓋蓋玻片，顯微鏡下觀察結果(見圖1)。從圖1中可以得出，通過對視網膜母細胞瘤的組織芯片進行H3K27me3免疫熒光染色，證實視網膜母細胞瘤組織中H3K27me3甲基化程度相較正常組織顯著升高。

實施例2

染色質免疫沉淀技術(ChIP)實驗