[發明專利]一種具有促進疫苗免疫反應的法氏囊活性九肽及其應用

有效

• 申請號: 201710030851.4
• 申請日: 2017-01-17
• 公開（公告）號: CN108314708B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 馮秀麗;周廣防;宗嫚嫚;周川杰;鄭陽;余遠楠;曹瑞兵;陳溥言
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/08;A61P37/04;A61P31/14
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;杜靜

本發明涉及一種具有促進疫苗免疫反應的法氏囊活性九肽。本發明所述的免疫活性肽是一種來源于法氏囊的小分子多肽，氨基酸組成為Leu Met Thr Phe Arg Asn Glu Gly Thr，結構簡單，免疫原性極弱。本發明活性肽具有促進疫苗免疫反應的功能，對小鼠具有刺激抗體產生、細胞免疫反應、淋巴細胞活力增強和提高疫苗免疫效力作用。本發明可作為疫苗佐劑或免疫增強劑應用于動物疫苗應用研究，以提高動物機體針對特異抗原的免疫應答能力，提高疫苗的免疫效力，從而提高動物機體抗疫病感染的能力，可應用于基礎免疫研究、臨床應用研究等領域。

技術領域

本發明屬于獸醫生物制品技術領域，具體涉及一種具有促進疫苗免疫反應的法氏囊活性九肽及其應用。

背景技術

日本乙型腦炎(Japaneses encephalitis，簡稱乙腦)是由乙型腦炎病毒(Japanneses encephalitis virus,JEV)引起的一種危害嚴重的人畜共患傳染病，臨床上以高熱、意識障礙、抽搐及腦膜刺激癥為特征，嚴重者出現中樞性呼吸衰竭。乙腦病死率高，即使治愈也常伴有后遺癥。乙腦病毒的傳播主要呈現：豬-蚊-人模式，豬是重要的病毒擴增宿主，人是終末宿主，而蚊子是關鍵的傳播媒介。目前控制乙腦的主要手段是宿主接種疫苗。隨著全球氣候變暖和人口流動性增大引起的蚊媒傳染病發病率上升，JEV的防控策略顯得越來越緊迫。因此如何誘導機體產生有效持久的免疫保護應答是相關科研工作人員迫切需要解決的現實問題。

疫苗免疫不僅是當前畜禽傳染病防制的主要措施。臨床上使用的大多數疫苗配合佐劑才能發揮良好的功效。因而，安全、無殘留、有效的新型免疫增強劑研究及技術創新已成為我國動物疫病防控規劃的重要舉措。

發明內容

本發明的目的在于提供一種價格低、安全、無殘留的高效促進疫苗免疫效果的新型活性肽，可作為疫苗佐劑或免疫增強劑應用于動物疫苗應用研究，以提高動物機體針對特異抗原的免疫應答能力，提高疫苗的免疫效力，從而提高動物機體抗疫病感染的能力，可應用于基礎免疫研究、臨床應用研究等領域。

一種法氏囊多肽BP9，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，為：5’-Leu Met Thr PheArg Asn Glu Gly Thr-3’。

本發明所述法氏囊多肽BP9在制備免疫藥物中的應用，優選的在制備畜禽免疫藥物中的應用，特別優選的，在制備預防乙型腦炎藥物中的應用。

一種預防乙型腦炎的免疫組合物，包含乙型腦炎及所述的法氏囊多肽BP9。

所述法氏囊多肽BP9優選以2～255μg/mL計量存在于免疫組合物中，更優選10～250μg/mL，進一步優選10～50μg/mL，最優選為10μg/mL。

本發明通過超濾濃縮技術，回收分子量1000Da以下的有效成分(即粗提物)。經真空干燥，再次濃縮，溶解后，用反向高效液相色譜(RP-HPLC)分離、純化多種法氏囊中的活性成分。經MODIL-TOF質譜分析，測定該法氏囊活性肽的分子量為1068.22(m/z)，并獲得完整的氨基酸序列，即LMTFRNEGT(即5’-Leu Met Thr Phe Arg Asn Glu Gly Thr-3’，序列1)，并命名為法氏囊多肽(BP9)。在小鼠免疫中，添加0.01mg/mL和0.05mg/mL劑量BP9的實驗組JEV疫苗免疫效力顯著高于未加該組分的疫苗對照組。

1.法氏囊多肽BP9的制備

利用超濾濃縮和分子篩技術，回收分子量小于1KDa的法氏囊粗提物，經真空冷凍干燥，超純水稀釋后用反向高效液相色譜(RP-HPLC)分離，收獲特定洗脫峰值的法氏囊多肽成分。通過刺激雜交瘤細胞，能夠抗體水平升高的組分經MODIL-TOF質譜分析，測定該法氏囊活性肽的分子量為1068.22(m/z)，并獲得該法氏囊多肽的完整氨基酸序列，即LMTFRNEGT。通過人工合成BP9，以一定濃度進行驗證實驗。

2.法氏囊多肽BP9促進JEV滅活疫苗實驗