[發明專利]用于檢測人類皰疹病毒8型感染的多肽及試劑盒

在審

• 申請號: 201710030268.3
• 申請日: 2017-01-17
• 公開（公告）號: CN106831962A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 程林;趙方;唐嫻;王輝;陳志偉;杜飛嫦;何琳
• 申請（專利權）人: 深圳市第三人民醫院
• 主分類號: C07K14/03
• 分類號: C07K14/03;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 深圳國新南方知識產權代理有限公司44374
• 代理人: 黃建才,李岱

技術領域

本發明屬于免疫學技術領域，具體涉及一種多肽以及人類皰疹病毒8型感染的間接ELISA抗體檢測試劑盒。

背景技術

人類皰疹病毒8型(human herpesvirus 8，HHV-8)，又稱卡波西肉瘤相關皰疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus，KSHV)，屬于γ-2型皰疹病毒。HHV-8為雙鏈DNA病毒，病毒基因組全長約170kb，包含至少81個開放閱讀框(open reading frame，ORF)。與其他皰疹病毒一樣，絕大多數的HHV-8在感染細胞后，以附加體的形式潛伏存在，隨細胞的分裂而增殖。ORF50基因編碼產物作為“分子開關”控制著HHV-8由潛伏到增殖狀態的轉換，被其激活后的HHV-8大量增殖，最終引起細胞破裂并釋放子代病毒。

人類皰疹病毒8型是一種重要的人類腫瘤病毒，它與卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)、原發性滲出性淋巴瘤、多中心卡斯特萊曼病和嗜生發中心淋巴細胞增殖紊亂等多種血液系統惡性疾病的發生密切相關，其中卡波西肉瘤是艾滋病患者常見的腫瘤及致死原因。艾滋病毒流行前，地中海地區HHV-8的人群感染率為4％～35％，而卡波西肉瘤的發病率每年只有0.03％，為美國的10倍；非洲KSHV的人群感染率高達30％～60％，而卡波西肉瘤只占男性腫瘤的6.4％～6.6％，女性中幾乎沒有卡波西肉瘤患者。但是在艾滋病流行后，非洲烏干達卡波西肉瘤患者占據男性癌癥患病的48.6％，女性癌癥患者的17.9％，成為當地最常見的腫瘤之一；在美國，卡波西肉瘤也成為患有艾滋病的男性同性戀者的常見腫瘤。艾滋病毒的感染能夠極大的提高卡波西肉瘤的發病率，并且艾滋病相關的波濟肉瘤具有更強的侵襲性(常常播散到肺、胃腸道、肝、腦和脾臟)和較高的死亡率。

艾滋病流行前我國人群卡波西肉瘤的發病率較低，上個世紀80年代起新疆地區才有少量病例報告。然而，艾滋病毒的流行使我國艾滋病相關的卡波西肉瘤患者急劇增加。目前我國人群的艾滋病毒感染數量已逾300萬，并且仍處于增長期。隨著艾滋病毒感染者數量的進一步增加，預計不久的將來中國將會出現大量的艾滋病相關卡波西肉瘤患者。為了評估皰疹病毒8型的感染率及由此發生艾滋病相關卡波西肉瘤的可能風險，可以高通量、快速、簡便的檢測皰疹病毒8型感染的試劑盒在當下就顯得尤為重要。然而，目前國內尚無檢測皰疹病毒8型感染的試劑盒。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種分離的多肽及其應用，本發明還提供了用于檢測皰疹病毒8型感染的試劑盒及其應用，采用該試劑盒檢測皰疹病毒8型感染不僅簡便、快速，而且具有高通量、特異性強和靈敏度高的特點。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

在一優選例中，檢測人類皰疹病毒8型感染及相關疾病的產品為間接ELISA抗體檢測試劑盒，但產品并不局限于此，還包括應用膠體金、斑點雜交、Western blot等方法的試劑盒。

本發明中出現的“5％脫脂奶粉”的制備方法為：每取5g脫脂奶粉(BD公司，貨號232100)，需要在其中加入PBS(Beyotime公司，貨號C0221A)直至100mL，即得到“5％的脫脂奶粉”。其它“1％脫脂奶粉”、“2.5％脫脂奶粉”和“10％脫脂奶粉”依此類推。“1％BSA”的制備方法為：每取1g BSA(Beyotime公司，貨號ST023)，需要在其中加入PBS(Beyotime公司，貨號C0221A)直至100mL。本發明中出現的“待檢測樣品、陽性血清和陰性血清分別用5％脫脂奶粉按1:100進行稀釋”是指當分別每取檢測樣品、陽性血清和陰性血清1mL時，需要分別在其中加入100mL的5％脫脂奶粉進行稀釋。其它比例依此類推。

本發明中出現的PBS-T洗滌液的制備方法為：每1L PBS(Beyotime公司，貨號C0221A)溶液中加入1mL吐溫20(Beyotime公司，貨號ST825)，混勻后即為PBS-T洗滌液。

本發明中出現的“辣根過氧化物酶標記的羊抗人二抗的工作濃度為1:2500”是指在使用辣根過氧化物酶標記的羊抗人二抗時，需采用5％脫脂奶粉以1:2500的比例加以稀釋，即每取辣根過氧化物酶標記的羊抗人二抗1mL時，需在其中加入2500mL的5％脫脂奶粉。其它比例依此類推。

本發明第一方面提供了分離的多肽，所述多肽的氨基酸序列選自：

1)包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或

2)多肽的同源序列，其與SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列有至少70％-99％的同一性；或