[發明專利]一種利拉魯肽的制備方法

有效

• 申請號: 201710030103.6
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN107056927B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 龍春艷;易文鋮;楊玲玲;倪紅飛;田安全
• 申請（專利權）人: 四川吉晟生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產權代理有限公司 51230
• 代理人: 王正楠

1.一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)用脫保護試劑將Fmoc-Gly-Wang樹脂脫保護，去Fmoc保護基團；

(2)將去保護的Fmoc-Gly-Wang樹脂與保護氨基酸逐一偶聯獲得利拉魯肽主鏈樹脂；其中

第12位～第14位三個保護氨基酸是以保護肽片段X進行偶聯；

第20位～第22位三個保護氨基酸是以保護肽片段Y進行偶聯；

第31位以Boc-His(trt)-OH保護形式進行偶聯；

所述X為Ala-Ala-Lys；所述Y為Val-Ser-Ser；

(3)將利拉魯肽主鏈肽樹脂脫除賴氨酸側鏈的alloc保護，逐一偶聯側鏈，得到利拉魯肽肽樹脂；

(4)將利拉魯肽肽樹脂在裂解液中裂解，得到利拉魯肽粗品；

(5)將利拉魯肽粗品純化，得到利拉魯肽精品；

所述步驟(2)的偶聯反應中加入活化劑，所述活化劑為1-羥基苯并三唑或N-羥基-7-氮雜苯并三氮唑；

接入X對應的保護肽片段為Fmoc-Ala-Ala-Lys(alloc)-OH；接入Y對應的保護肽片段為Fmoc-Val-Ser(tbu)-Ser(tbu)-OH；Fmoc-Gly-Wang樹脂與保護氨基酸和保護肽片段偶聯時，先反應得到的保護氨基酸樹脂脫去Fmoc保護基后再與下一個保護氨基酸偶聯反應；

所述Fmoc-Gly-Wang樹脂的取代度≤0.35mmol/g；

其偶聯氨基酸片段為：

Boc-His(trt)-Ala-Glu(otbu)-Gly-Thr(tbu)-Phe-Thr(tbu)-Ser(tbu)-Asp(otbu)-Y(tbu)-Tyr(tbu)-Leu-Glu(otbu)-Gly-Gln(trt)-X(alloc)-Glu(otbu)-Phe-Ile-Ala-Trp(boc)-Leu-Val-Arg(pbf)-Gly-Arg(pbf)-Gly-Wang樹脂，

其中X為Ala-Ala-Lys；Y為Val-Ser-Ser。

2.如權利要求1所述的一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于,所述步驟(1)的脫保護試劑為哌啶/DMF溶液，哌啶占所述脫保護試劑的體積百分比為30～50％；所述脫保護的反應溫度為10～25℃。

3.如權利要求1所述的一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中選用的偶聯試劑為N,N-二異丙基碳二亞胺、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、2-(7-氮雜-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽，O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯中的一種。

4.如權利要求1所述的一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于，所述偶聯過程中保護氨基酸或保護肽片段的用量為樹脂總摩爾量的2倍～6倍。

5.如權利要求1所述的一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中，脫除賴氨酸側鏈的alloc保護基的試劑為四三苯甲磷鈀和嗎啉/THF混合溶液。

6.如權利要求1所述的一種利拉魯肽的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，裂解液含有三氟醋酸體積占比為80％～95％、1,2-乙二硫醇體積占比為1％～10％、三異丙基硅烷體積占比為1％～5％，溶劑為水。