[發明專利]細菌發酵生產糖蛋白絮凝劑中提高產量活性穩定性的方法

有效

• 申請號: 201710029188.6
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN106834390B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 聶麥茜;聶紅云;宋勃軒
• 申請（專利權）人: 西安建筑科技大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C02F1/56;C12R1/22
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李婷;王孝明

1.一種細菌發酵生產糖蛋白絮凝劑中提高產量活性穩定性的方法，其特征在于，該方法以克雷伯氏菌NY1種子液作為種子液，以加入蔗糖、丙酮酸鈉和α-酮戊二酸鈉的無機鹽培養基為發酵體系，進行微生物發酵培養，提取微生物絮凝劑；

該方法包括以下步驟：

步驟一，制備種子液：

從克雷伯氏菌NY1菌株保存斜面上挑取一環菌接入牛肉膏蛋白胨液體培養基中培養，得到克雷伯氏菌NY1種子液；

步驟二，制備發酵體系：

向無機鹽培養基中加入蔗糖、丙酮酸鈉和α-酮戊二酸鈉，溶解，滅菌，得到發酵體系；

步驟二中，蔗糖投加量為20～21g/L，丙酮酸鈉投加量為1～5g/L，α-酮戊二酸鈉投加量為1～4g/L；

步驟三，微生物發酵：

向步驟二制得的發酵體系中接種步驟一制得的克雷伯氏菌NY1種子液，在搖床上，恒溫好氧條件下培養3d，得到發酵液；

步驟四，提取微生物絮凝劑：

將步驟三制得的發酵液離心去除NY1菌體，得到上清液，把上清液與無水乙醇按體積比1：3混合，收集漂浮凝聚體，將收集到的漂浮凝聚體，再溶于體積為發酵液體積三分之一的蒸餾水中；

重復離心得到上清液和乙醇提取的過程，再次離心去除菌體，用無水乙醇提取，反復提取三次，取漂浮凝聚體在未干前分裝，凍干，得到糖蛋白絮凝劑。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟一中，所述的克雷伯氏菌NY1種子液的OD_600nm為1.78±0.06。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟二中，蔗糖投加量為20g/L，丙酮酸鈉投加量為4g/L，α-酮戊二酸鈉投加量為2g/L。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟二中，所述的無機鹽培養基包括：2.5gNaNO₃，1mL微量元素，2mL 1M MgSO₄·7H₂O溶液，0.2mL 1M CaCl₂·2H₂O溶液，30mL磷酸鹽緩沖液，調pH為7.8，加蒸餾水于1000mL容量瓶中定容，121℃高壓水蒸氣滅菌30min；

所述的微量元素由以下原料配制而成：2.5g FeSO₄·7H₂O，0.1g ZnSO₄·7H₂O，0.2gMnCl₂·4H₂O，0.024g CoCl₂·6H₂O，0.024g NiCl₂·6H₂O，0.017g CuCl₂·2H₂O，0.109gNa₂MoO₄·2H₂O，0.062g H₃BO₃，5mL 12.1M HCl，溶于1000mL蒸餾水。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三中，所述的克雷伯氏菌NY1種子液的接種體積比為1.8％～2.2％。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟三中，發酵培養時，搖床溫度為27℃～31℃，轉速為130～165rpm。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟三中，發酵培養時，搖床溫度為28℃，轉速為165rpm。