[發明專利]雜交瘤細胞株7G11及其抗體

有效

• 申請號: 201710029162.1
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN106701688B
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 馬良;鐘紅;張宇昊
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/14;G01N33/535;G01N33/577
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發明涉及一種雜交瘤細胞株7G11及其抗體，雜交瘤細胞株7G11于2016年12月27日送中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC NO:C201703，該雜交瘤細胞株7G11能夠產生抗細交鏈格孢菌酮酸的單克隆抗體，能夠特異性檢測細交鏈格孢菌酮酸，對細交鏈格孢菌酮酸檢測具有重要意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及雜交瘤細胞株7G11，還涉及由該雜交瘤細胞株7G11產生的抗體。

背景技術

細交鏈格孢菌酮酸(Tenuazonic acid，TA)是鏈格孢霉、稻瘟病霉、高粱點霉等在特定條件下產生的有毒代謝產物之一，是繼交鏈孢酚(Alternariol，AOH)、交鏈孢酚單甲醚(Alternariol monomethyl ether，AME)后發現的一種鏈格孢霉毒素。TA具有急性毒性、亞急性毒性、潛在致癌性、細胞毒性，導致哺乳類動物頭暈、流涎、嘔吐繼而出現心跳過速、食道和腸胃大面積出血及循環衰竭、死亡。由于TA具有多種生物學特性，且是鏈格孢霉毒素中毒性最大的一種，有研究報道TA可以協同增強其他真菌毒素，具有巨大的潛在危害，近些年越來越引起各方關注和研究。

TA人工抗原合成方法及多克隆抗體制備已有部分報道，如江濤等利用碳二亞胺法對TA結構進行修飾，與牛血清蛋白偶聯制備人工抗原；馬良等采用肟化法對TA進行衍生引入偶聯臂，與牛血清蛋白和血藍蛋白偶聯，偶聯物免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體；楊星星等利用水合肼和乙醛酸依次對TA進行衍生，合成含氮雜共軛雙鍵偶聯臂，與牛血清蛋白進行偶聯得到完全抗原，通過免疫新西蘭大白兔制備特異性識別TA衍生物的多克隆抗體，并建立ELISA檢測方法。

多克隆抗體制備時間短、制備成本低，但在特異性方面比單克隆抗體差，不同批次和不同動物的免疫反應之間的有差別。單克隆抗體特異性高，一旦篩選到目標細胞株，理論上就可以生產完全一致的抗體，并且通過連續培養法可以獲得大量的性能一致的抗體，產品的批間差異小。目前關于TA單克隆抗體的制備及其產品開發目前處于空白階段，尚無任何報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種雜交瘤細胞株7G11；本發明的目的之二在于提供雜交瘤細胞株7G11的制備方法；本發明的目的之三在于提供由雜交瘤細胞株7G11產生的單克隆抗體；本發明的目的之四在于提供上述單克隆抗體的制備方法；本發明的目的之五在于提供單克隆抗體的應用。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、雜交瘤細胞株7G11，所述雜交瘤細胞株7G11的生物保藏編號為CCTCC NO：C201703。

2、所述雜交瘤細胞株7G11的制備方法，將TAO偶聯血藍蛋白免疫原與弗氏佐劑混合免疫小鼠，然后取效價大于1：10000的免疫小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0進行融合，融合后培養10天后進行ELISA檢測，經篩選亞克隆獲得雜交瘤細胞。

優選的，融合中所述脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0數量比為1：20。

3、由雜交瘤細胞株7G11產生的單克隆抗體，所述雜交瘤細胞株7G11的生物保藏編號為CCTCC NO：C201703。

4、所述單克隆抗體的制備方法，將雜交瘤細胞株7G11制備腹水，然后進行ProteinA純化，得單克隆抗體。

5、所述單克隆抗體在制備檢測TAO抗原的試劑中的應用。

優選的，所述單克隆抗體在制備elisa競爭法檢測細交鏈格孢菌酮酸的試劑中的應用。

優選的，所述單克隆抗體在制備elisa間接法檢測細交鏈格孢菌酮酸的試劑中的應用。