[發(fā)明專(zhuān)利]一種同時(shí)檢測(cè)谷物中多種真菌毒素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710028053.8
• 申請(qǐng)日: 2017-01-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106770836A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段勁生;孫明娜;高同春;董旭;王梅;肖青青;褚玥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 合肥國(guó)和專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙)34131
• 代理人: 孫永剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)谷物中多種真菌毒素的方法，尤其涉及一種采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UHPLC-MS/MS)同時(shí)檢測(cè)谷物中10種真菌毒素的方法，屬于食品安全檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

真菌毒素是真菌在在適宜的環(huán)境條件下產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，從古至今一直對(duì)人類(lèi)、動(dòng)物和植物具有巨大的潛在威脅。1960年，英國(guó)發(fā)生了10萬(wàn)多只火雞中毒死亡事件，研究發(fā)現(xiàn)，飼料中有從巴西進(jìn)口的霉變的花生餅粉，用這種花生餅粉喂養(yǎng)大白鼠能誘發(fā)肝癌，誘發(fā)肝癌的物質(zhì)被證實(shí)為黃曲霉的代謝產(chǎn)物，命名為黃曲霉毒素(Aflatoxins)。我國(guó)50年代發(fā)生的馬和牛的霉玉米中毒和甘薯黑斑病中毒、長(zhǎng)江流域的赤霉病中毒、華南的霉甘蔗中毒等，都是與食物中帶染真菌和存在真菌毒素有關(guān)。受全球氣候變暖、干旱等因素的影響，食用和飼用農(nóng)產(chǎn)品受真菌毒素污染日趨嚴(yán)重，世界各地對(duì)于真菌毒素污染的報(bào)道日漸增多，有時(shí)同一地區(qū)可檢出多種真菌毒素或同一真菌毒素同時(shí)在世界各地被報(bào)道。受污染的也不僅限于玉米、小麥、大麥、花生等谷物，亦有干果、水果、中藥材、牛奶等。真菌毒素主要包括黃曲霉毒素、鐮刀菌毒素等。對(duì)人類(lèi)危害大的真菌毒素有十幾種，一般由青霉屬、曲霉屬以及鐮刀菌屬的霉菌產(chǎn)生，具有毒性強(qiáng)和污染頻率高的特點(diǎn)，其中包括黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、雜色曲霉毒素、展青霉素、玉米赤霉烯酮、串珠鐮刀菌素、T-2毒素、HT-2毒素，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、二乙酸鑣草鐮刀菌烯醇等。

由于真菌毒素的低濃度高危害性，目前全世界很多國(guó)家都對(duì)真菌毒素規(guī)定了其在食品中的殘留限量。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 2761-2011)規(guī)定了食品中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素M1、赭曲霉毒素A、展青霉素、玉米赤霉烯酮、脫氧鐮刀雪腐菌烯醇等6類(lèi)真菌毒素的限量，限量范圍從0.5u g/kg到1000u g/kg不等。

谷類(lèi)作為中國(guó)人的傳統(tǒng)飲食，幾千年來(lái)一直是老百姓餐桌上不可缺少的食物之一，在我國(guó)的膳食中占有重要的地位，被當(dāng)作傳統(tǒng)的主食，主要包括水稻、小麥和玉米。由于真菌在自然界分布極為廣泛，谷物從種植、采收到貯藏的過(guò)程中易被真菌污染，并在不利的環(huán)境下大量產(chǎn)生毒素，這些真菌毒素會(huì)在人體中蓄積，降解緩慢，因此對(duì)人健康危害極大。

我國(guó)針對(duì)食品中真菌毒素制定了GB 2761-2011《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》，其中包括以下毒素的限量規(guī)定：制定了玉米中黃曲霉素B₁限量為20μg/kg，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇限量為1000μg/kg，玉米赤霉烯酮限量為60μg/kg；制定了稻谷中黃曲霉素B₁限量為10μg/kg；制定了小麥中黃曲霉素B₁限量為5μg/kg，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇限量為1000μg/kg。但我國(guó)尚未規(guī)定伏馬菌素在食品中限量，美國(guó)FDA規(guī)定了伏馬菌素在玉米中殘留限量總和為2000μg/kg；除黃曲霉素B1外，我國(guó)尚無(wú)其他黃曲霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)，歐盟規(guī)定玉米中黃曲霉素B1限量5μg/kg，總量限量為10μg/kg，亦規(guī)定谷物中黃曲霉素B1限量2μg/kg，總量限量為4μg/kg。同時(shí)，國(guó)標(biāo)GB2761-2011也規(guī)定了黃曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的檢測(cè)方法，分別是GB/T 18979-2003、GB/T 23503-2009和GB/T5009.209-2011，主要采用免疫親和柱凈化液相色譜檢測(cè)法和熒光光度法檢測(cè)，而此類(lèi)方法采用的免疫親和色譜柱較為昂貴，樣品前處理操作方法復(fù)雜。

目前常用的針對(duì)食品中真菌毒素殘留量的檢測(cè)技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA)、薄層色譜(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)等。酶聯(lián)免疫法原理是利用抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)；薄層色譜法是根據(jù)與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值(Rf)作對(duì)比，進(jìn)行含量測(cè)定的方法，這兩者均為半定量方法，多用于一種或少數(shù)幾種毒素的初步篩查；高效液相色譜法是采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析，此法定量準(zhǔn)確，但對(duì)于同時(shí)檢測(cè)多組分的真菌毒素，以及對(duì)樣品基質(zhì)凈化不完全時(shí)，目標(biāo)化合物在色譜柱上無(wú)法實(shí)現(xiàn)基線分離，無(wú)法對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行準(zhǔn)確定量。