[發明專利]一種彎曲毛細管電泳檢測抗體多肽相互作用的方法

有效

• 申請號: 201710026653.0
• 申請日: 2017-01-14
• 公開（公告）號: CN106596692B
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 王建浩;滕一萬;楊麗;柳麗;邱琳;蔣鵬舉;劉曉騫;丁淑敏;趙遠;顧婷;朱志蘭
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N21/64
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本發明屬于生物分析領域，涉及一種利用彎曲毛細管電泳檢測抗體多肽相互作用的方法。將毛細管電泳所用的毛細管分別彎曲成不同個數的半圓，固定后，先進樣熒光染料標記的多肽，間隔5?20s后進樣抗體，一定時間后，抗體追趕上多肽，并在彎曲毛細管內充分混合，經熒光光譜儀檢測復合物和熒光多肽的出峰時間及熒光強度。上述技術方案操作簡單，可重復性高，建立了一種新的高靈敏抗體多肽相互作用檢測技術。

技術領域

本發明涉及生物分析領域，具體涉及一種彎曲利用毛細管電泳檢測抗體多肽相互作用的方法。

背景技術

FLAG多肽被廣泛用作融合標簽來純化和檢測重組蛋白，單克隆anti-FLAG M2抗體能夠特異性識別FLAG多肽，所以可以通過免疫印跡，免疫沉淀和免疫組織化學等方法高靈敏檢測FLAG融合蛋白。

研究抗原抗體相互作用的常用方法有表面等離子共振、酶聯免疫吸附試驗、等溫量熱法和高性能尺寸排阻色譜法等。這些方法操作較繁瑣，耗費的樣品多，而且不能達到較好的分離效果。

電泳是電介質中帶電粒子在電場作用下以不同速度向電荷極性相反的電極方向遷移的現象，利用這種現象對化學或生物樣品組分進行分離分析的技術稱為電泳技術。毛細管電泳技術是20世紀80年代中后期發展起來的一種分離分析技術。毛細管電泳優勢很多：設備簡單，分析快速，樣品微量，現已發展成為一種有效的分離手段，被廣泛應用于生物、環境、制藥、毒理學、臨床、食品分析等領域。毛細管電泳與熒光檢測相結合，大大提高了檢測限，拓展了毛細管電泳的應用。利用毛細管電泳檢測抗體多肽相互作用的方法，克服了已有方法存在的缺陷，但這種方法同時存在精確性不高及穩定性不好的缺點。

發明內容

本發明的目的：針對目前研究抗原抗體相互作用方法存在精確性不高、穩定性不好等問題，本發明提供了一種利用彎曲毛細管電泳檢測抗體多肽相互作用的方法，研究了毛細管彎曲程度對抗體多肽相互作用的影響。

本發明的技術方案：所用的彎曲毛細管為石英毛細管，先進樣熒光染料標記的多肽，間隔5-20s后進樣抗體，經熒光光譜儀檢測抗體多肽復合物和熒光多肽的出峰時間及熒光強度。

作為優選，所述的彎曲毛細管的內徑為75μm，外徑為365μm，彎曲的半圓個數為1-4個，彎曲的直徑為2-5cm。

作為優選，所述的彎曲毛細管為180°等寬圓弧彎曲毛細管。

作為優選，所述的熒光染料標記的多肽進樣時間為5-40s，所述的抗體進樣時間為5-40s，所述的抗體進樣間隔為10s，其中間隔為多肽完全進樣后再進樣抗體的時間間隔。

作為優選，所述的熒光染料為FAM、TAMRA、Cy5中的一種。

作為優選，所述的多肽序列為DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK。

作為優選，所述的抗體為anti-FLAG M2。

本發明的技術效果：目前對彎曲毛細管電泳的研究很少，一篇論文(陳國強.彎曲微通道中樣品電泳輸送特性的研究【D】.大連：大連理工大學，2005:1-1)研究的是微流控電泳芯片分析技術，但其設計復雜，操作繁瑣。其中提到的彎曲微通道的寬度為80μm，收縮比為31％，以避免“彎曲效應”對分離造成的不利影響。本發明使用的毛細管為寬度75μm的180°等寬圓弧彎曲毛細管，最大限度地發揮了彎曲毛細管的“彎曲效應”，以提高多肽和抗體的混合程度。在狹小的毛細管內，分子的布朗運動表現明顯，特別是在完全彎曲毛細管的拐角處，由于在高壓作用下，多肽和抗體處于高速運動，特別是達到拐角處發生碰撞，分子的無規則運動尤為突出，達到了分子級別的融合，這樣形成的多肽和抗體復合物混合充分、相態均一；另外，彎曲毛細管增加了多肽和抗體在毛細管中停留的時間，有利于提高多肽和抗體之間的相互作用，因此檢測的結果穩定性更好，精確性和靈敏度更高，操作簡單，進一步拓展了毛細管電泳在生物分析領域的應用。

附圖說明