[發(fā)明專利]用于蛋白質(zhì)或多肽的混合物的從上到下多路復(fù)用質(zhì)譜分析的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710026358.5
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106970228B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: P·F·易;J·L·小斯蒂芬森;J·E·P·賽卡
• 申請（專利權(quán)）人: 薩默費尼根有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/04;H01J49/00
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;楊昀

1.一種用于識別液體樣本內(nèi)的蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的存在或不存在的方法，所述樣本包括化合物的混合物，所述混合物包含多種蛋白質(zhì)化合物或多種多肽化合物或多種蛋白質(zhì)和多肽化合物，所述方法包括以下步驟：

(a)將所述液體樣本的一部分引入到質(zhì)譜儀的電噴射電離源中；

(b)通過電噴射電離形成所述液體樣本的所述部分的所述化合物混合物的帶正電離子，所述帶正電離子包括多個離子物質(zhì)；

(c)隔離包括第一質(zhì)荷比(m/z)比率范圍的所述離子物質(zhì)的第一子集，所述范圍包含所述分析物化合物的特定預(yù)定多質(zhì)子化分子物質(zhì)的質(zhì)荷比；

(d)通過致使所述隔離的離子物質(zhì)的第一子集在預(yù)定持續(xù)時間中與反應(yīng)劑陰離子反應(yīng)而從所述隔離的離子物質(zhì)的第一子集產(chǎn)生多個第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)，所述反應(yīng)劑陰離子在反應(yīng)后從一或多個離子物質(zhì)中的包括蛋白質(zhì)或多肽化合物的質(zhì)子化分子物質(zhì)的每一者提取質(zhì)子；

(e)使用質(zhì)量分析器產(chǎn)生所述第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)或從所述第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)產(chǎn)生的第二代產(chǎn)物離子物質(zhì)的質(zhì)譜；

(f)從所述第一代或所述第二代產(chǎn)物離子物質(zhì)的所述質(zhì)譜辨識作為所述蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的診斷的一或多個質(zhì)荷比的集合；以及

(g)如果在所述質(zhì)譜中識別出一或多個質(zhì)荷比的所述集合，那么識別所述樣本內(nèi)的所述分析物化合物的存在，

其中辨識作為所述蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的診斷的一或多個質(zhì)荷比的所述集合的所述步驟(f)采用數(shù)學(xué)分析算法，其中所述質(zhì)譜中觀測到的峰的強度表示為布爾型值且每一峰的所述質(zhì)荷比由變量T(m/z)表示，其中T(m/z)＝ln((m/z)-M_proton)且M_proton是質(zhì)子的質(zhì)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括第二次重復(fù)所述步驟(a)到(e)，其中在所述步驟(a)到(e)的所述第二次重復(fù)期間或之前執(zhí)行所述步驟(f)和(g)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括多次重復(fù)執(zhí)行步驟(a)到(g)，其中步驟(a)的每一重復(fù)包括將來自對應(yīng)于相應(yīng)滯留時間的層析柱的溶離液引入到所述電噴射電離源中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中辨識作為所述蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的診斷的一或多個質(zhì)荷比的所述集合的所述步驟(f)包括辨識對應(yīng)于所述分析物化合物的多質(zhì)子化離子物質(zhì)序列的所述第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)的所述質(zhì)譜內(nèi)的一系列質(zhì)荷比，所述分析物化合物的所述多質(zhì)子化離子物質(zhì)相對于所述特定預(yù)定多質(zhì)子化分子物質(zhì)的電荷態(tài)逐漸地減少電荷。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中：

所述步驟(c)包括進一步隔離所述離子物質(zhì)的第二子集，所述第二子集包括第二質(zhì)荷比范圍，所述第二質(zhì)荷比范圍包含第二蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的特定預(yù)定多質(zhì)子化分子物質(zhì)的質(zhì)荷比；

所述步驟(f)包括從所述第一代或所述第二代產(chǎn)物離子物質(zhì)的所述質(zhì)譜且使用所述數(shù)學(xué)分析算法辨識作為所述第二蛋白質(zhì)或多肽分析物化合物的診斷的一或多個質(zhì)荷比的第二集合；且

所述步驟(g)包括如果在所述質(zhì)譜中識別出質(zhì)荷比的所述第二集合，那么識別所述樣本內(nèi)的第二分析物化合物的存在。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述第一子集的質(zhì)荷比范圍相同于所述第二質(zhì)荷比范圍。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述步驟(c)包括同時隔離包括所述第一子集的質(zhì)荷比范圍的所述離子物質(zhì)的所述第一子集以及包括所述第二質(zhì)荷比范圍的所述離子物質(zhì)的所述第二子集以使得所述第一子集的質(zhì)荷比范圍和第二質(zhì)荷比范圍是非鄰接的。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中產(chǎn)生多個第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)的所述步驟(d)包括致使所述步驟(c)隔離的離子物質(zhì)的第一子集和反應(yīng)劑陰離子在一持續(xù)時間中反應(yīng)，所述持續(xù)時間致使在步驟(e)中的所述質(zhì)譜的后續(xù)產(chǎn)生期間所述步驟(d)的第一代產(chǎn)物離子物質(zhì)穩(wěn)定而不會分解。