[發(fā)明專利]一種獲得耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆材料的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710025523.5
• 申請(qǐng)日: 2017-01-13
• 公開（公告）號(hào): CN107058381A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張玲;李飛武;董英山;張?jiān)?/a>;譚喜昌;馬虹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/84
• 分類號(hào): C12N15/84;A01H1/02;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種含有AgGlpF基因的植物表達(dá)載體pYL-AgGlpF，其特征在于：該載體含有AgGlpF基因和抗除草劑基因bar，通過將AgGlpF基因的全長(zhǎng)序列進(jìn)行XmaI和SpeI雙酶切，并克隆到基礎(chǔ)載體pYL的T-DNA區(qū)多克隆位點(diǎn)而得到。

2.一種轉(zhuǎn)AgGlpF基因耐鹽大豆的培育方法，其特征在于：先將AgGlpF基因克隆構(gòu)建至表達(dá)載體pYL中，再利用遺傳轉(zhuǎn)化方法將AgGlpF基因轉(zhuǎn)入大豆受體品種P3的基因組中，最終得到耐鹽轉(zhuǎn)基因大豆材料。

3.權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)AgGlpF基因耐鹽大豆的培育方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化：將權(quán)利要求1所述的植物表達(dá)載體pYL-AgGlpF，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入大豆受體品種的基因組中，獲得T0代轉(zhuǎn)化植株；

（2）轉(zhuǎn)AgGlpF基因大豆材料的篩選：應(yīng)用Bar試紙條檢測(cè)、草胺膦除草劑涂抹、AgGlpF基因PCR擴(kuò)增等方法對(duì)T0代轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行篩選鑒定，獲得陽性植株，進(jìn)行自交獲得T1代種子；對(duì)T1代陽性植株進(jìn)行Southern blot分析，獲得外源目的基因?yàn)閱慰截惖霓D(zhuǎn)基因材料，進(jìn)行自交獲得T2代種子；

（3）轉(zhuǎn)AgGlpF基因大豆材料的耐鹽性鑒定：用200mM NaCl溶液對(duì)T2代陽性植株進(jìn)行耐鹽性鑒定，獲得轉(zhuǎn)AgGlpF基因耐鹽大豆材料。

4.權(quán)利要求2和權(quán)利要求3所述的轉(zhuǎn)AgGlpF基因耐鹽大豆，其特征在于：

（1）所述轉(zhuǎn)基因大豆與所述受體大豆相比，耐鹽性顯著提高；

（2）所述轉(zhuǎn)基因大豆與所述受體大豆相比，抗除草劑效果顯著提高。