[發明專利]一種檢測ITPA94C>T基因多態性的引物及其PCR方法

在審

• 申請號: 201710024946.5
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106868109A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 黃民;王雪丁;管少興;鄭洪;朱霞;溫鼎聲;馮薇;胡品津;高翔;郅敏;晁康
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明屬于醫學生物技術領域。更具體地，涉及一種檢測ITPA 94C>T基因多態性的引物及其PCR方法。

背景技術

臨床上，硫嘌呤類藥物（巰基嘌呤類藥物）應用廣泛。但是，該類藥物的不良反應發生率較高，包括骨髓抑制、肝臟損害、胃腸紊亂、胰腺炎和流行感冒樣癥狀等。

目前的研究認為，巰基嘌呤類藥物的不良反應可能與藥物的代謝途徑及基因多態性有關。巰基嘌呤甲基轉移酶（thiopurine methyltransferase，TPMT）和三磷酸肌苷焦磷酸酶（inosine triphosphate pyrophosphatase，ITPA）是巰基嘌呤類藥物的代謝酶，其中TPMT是巰基嘌呤類藥物代謝的關鍵酶，TPMT和ITPA存在明顯的遺傳多態性。但是仍然有部分患者的不良反應的發生，無法解釋。

發明內容

本發明的目的是提供一種用PCR方法檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR。可以根據電泳結果確定ITPA 94C>T基因多態性位點的基因型，結合個體的其他生物學指標對于巰基嘌呤類藥物的療效和副作用進行預測，克服了臨床選擇巰基嘌呤類藥物的盲目性，在基因型分析的基礎上可以預測患者使用巰基嘌呤類藥物的有效性和安全性，指導臨床用藥，使患者能夠進行個體化醫療。

本發明的另一目的是提供上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在制備通過PCR擴增生物樣品檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的試劑中的應用。

本發明的再一目的是提供一種包含上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR的ITPA 94C>T基因多態性位點檢測試劑盒。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種用PCR方法檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR，其序列分別如SEQ ID NO.1～4所示。

上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在檢測生物樣品ITPA 94C>T基因多態性位點方面的應用，也在本發明的保護范圍之內。

一種通過PCR擴增生物樣品檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的方法，是以待測生物樣品的DNA為模板，以上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR進行PCR擴增，根據擴增結果確定ITPA 94C>T基因多態性位點的基因型。

其中，所述待測生物樣品為患者外周血。

優選地，所述PCR擴增的反應體系為25μl，包括：DNA模板3μl，10×Taq buffer 2.5μl，0.25mmol/L dNTPs 2μl，10μmol/L上下游引物各1μl，5U/μl ExTaq? 0.15μl，余量ddH₂O。

優選地，所述PCR擴增的反應條件為：95℃ 5min；94℃ 30s，66℃/80℃ 30s，75℃ 15s，35個循環；75℃ 5min；4℃保存。

另外，上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR在制備通過PCR擴增生物樣品檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的試劑盒中的應用，以及包含上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR 的ITPA 94C>T基因多態性位點檢測試劑盒，也在本發明的保護范圍之內。

優選地，所述試劑盒還含有dNTPs、ExTaq聚合酶。

優選地，所述試劑盒還含有0.25mmol/L的dNTPs、5U/μl的ExTaq聚合酶。

本發明上述引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR以及用PCR方法檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的方法和試劑盒，可以用于檢測ITPA 94C>T基因多態性位點的基因型。

本發明的引物對ITPAwtF/ITPAwtR和ITPAmtF/ITPAmtR以及用PCR方法可以檢測ITPA 94C>T基因多態性，ITPA 94C>T基因多態性與巰嘌呤類藥物不良反應有關，可根據擴增電泳結果確定ITPA 94C>T基因多態性位點的基因型，對巰基嘌呤類藥物的療效和副作用進行預測，預測患者使用巰基嘌呤類藥物的有效性和安全性，指導臨床用藥，使患者能夠進行個體化醫療。