[發明專利]高山被孢霉CCFM698菌體的制備及其在飼料添加劑中的應用

有效

• 申請號: 201710024478.1
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106754436B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 陳海琴;陳永泉;陳衛;葛程鳳;唐鑫;楊芹;顧震南;張灝
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;A23K10/16;A23K50/75;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

本發明提供高山被孢霉在飼料添加劑中應用，所述高山被孢霉是重組高山被孢霉(Mortierella?alpina)MA?oPpFADS17?4(它同樣被命名為CCFM698)。本發明的高山被孢霉干燥菌體的總脂肪酸含量為以干燥菌體重量計30％?40％，其中EPA含量為以總脂肪酸重量計24％或以上。本發明的干燥菌體在飼料中的用量是基礎飼料總重量的0.5?1.5％，該菌體飼料添加劑的脂肪酸組成合理，EPA含量很高，能用于生產有利于食用者身體健康的高DHA雞蛋。飼喂含有本發明的飼料添加劑的飼料的蛋雞，所產雞蛋DHA含量達到了約120mg/個雞蛋，顯著高于現有技術。

【技術領域】

本發明涉及飼料添加劑，特別涉及一種高總脂肪酸含量、高EPA含量的高山被孢霉菌體，其生產方法及作為飼料添加劑的應用。

【背景技術】

多不飽和脂肪酸可分為ω-3，ω-6和ω-9等系列，ω-3系列PUFAs主要有α-亞麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)以及二十二碳六烯酸(DHA)。EPA具有抗凝血、抗癌、抗炎、防心血管病、降血脂等特殊生理功能，在醫藥保健品、食品和飼料行業均有較多的應用。EPA的生物來源主要包括海洋魚類和微生物發酵生產，微生物發酵法生產EPA原料豐富、周期短、價格便宜、占地面積小、不受氣候影響等，越來越受關注。目前通過微生物發酵法生產EPA的商業化產品是杜邦公司報道的New?Harvest^TM?EPA?oil和salmon，所用菌株是解脂耶氏酵母基因工程菌。高山被孢霉油脂含量豐富，野生型高山被孢霉需在低溫下能合成EPA，高山被孢霉MA-oPpFADS17是通過在野生型高山被孢酶中過表達來源于寄生疫霉的ω-3脂肪酸脫飽和酶，最終得到成功表達候選ω-3脂肪酸脫飽和酶的高山被孢霉重組菌株。將其發酵條件優化后，使得該菌株在廉價碳氮源的培養基中可以合成大量的EPA，將其制得的菌粉作蛋雞飼料的添加劑，可以大幅提高蛋黃DHA含量，改善飲食中ω-3和ω-6比例。

高山被孢霉應用于飼料添加劑屬于現有技術，例如中國發明專利申請CN104630077A公開的高山被孢霉CCFM442及其在生產菌體飼料添加劑中的應用。其中，根據其說明書的記載，干燥菌體中PUFAs含量占總脂肪酸含量的45.76％，其中AA含量占總脂肪酸含量24.43％，EPA含量占總脂肪酸含量的6.09％。將該菌體飼料添加劑(即干燥菌體)以基礎飼料總重量計5％與基礎飼料混合造粒飼喂蛋雞，所產雞蛋蛋黃中的DHA占總脂肪酸為1.06％，AA占總脂肪酸比例為3.26％，即，AA含量占全蛋0.32％，DHA含量占全蛋0.11％，均高于普通雞蛋。

然而，仍然期望通過對飼料的改進而進一步提高DNA在雞蛋中的含量。

【發明內容】

本發明的目的是克服現有技術缺陷，提供一種能夠提高雞蛋中DNA含量的飼料添加劑。

為了實現上述目的，本發明的原理是通過優化高山被孢霉的菌株選擇和發酵工藝，實現在常溫條件下大量積累EPA的高山被孢霉，以應用于飼料添加劑。

為此，本發明提供高山被孢霉在飼料添加劑中應用，所述高山被孢霉是重組高山被孢霉(Mortierella?alpina)MA-oPpFADS17-4(它同樣被命名為CCFM698)。

高山被孢霉CCFM698是通過過表達來源于寄生疫霉的ω-3脫飽和酶oPpFADS17基因的重組高山被孢霉，根據中國發明專利申請CN?201610184669X(一株過表達來源于寄生疫霉的ω-3脫飽和酶的重組高山被孢霉、其構建方法及應用)的記載，該菌株于2016年1月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?No.11820。

中國發明專利申請CN?201610184669X所述的高山被孢霉MA-oPpFADS17-4也被命名為高山被孢霉CCFM698。