[發明專利]一種用于L-蘋果酸的分離方法

有效

• 申請號: 201710023771.6
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN108300739B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發明（設計）人: 趙蘭坤;劉新利;劉元濤;賈召鵬;王俊銘;王婷;范婷婷;袁軍;薄文文
• 申請（專利權）人: 山東阜豐發酵有限公司
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C07C51/42;C07C59/245;C12R1/69;C12R1/66
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1.一種用于L-蘋果酸的分離方法，所述分離方法包括如下步驟：

步驟1）制備米曲霉種子液：將米曲霉菌液按照8％的接種量接入米曲霉種子罐中進行培養，在溫度為33℃，搖床轉速為200r/min，培養16小時得到米曲霉種子液；

步驟2）制備寄生曲霉種子液：將寄生曲霉菌液按照6％的接種量接入寄生曲霉種子罐中進行培養，在溫度為32℃，搖床轉速為200r/min，培養24小時得到寄生曲霉種子液；

步驟3）發酵：將米曲霉種子液和寄生曲霉種子液按照3:2的體積比混勻得到混合種子液，然后按照混合種子液∶發酵罐培養基為1∶8的體積比例轉入發酵罐中培養，溫度33℃，培養3d，然后添加碳酸鈣，維持碳酸鈣的濃度在80g/L，繼續發酵3d，停止發酵，得到L-蘋果酸發酵液；

步驟4）離心、過濾以及離子交換：將L-蘋果酸發酵液2000rpm離心10min，去除沉淀，收集上清液，微濾膜過濾，截留分子量為10000Da，微濾溫度為30℃；濾過液再進行超濾，截留分子量為1000Da，超濾溫度為30℃，收集透過液，將透過液通過裝填有強堿弱酸型兩性離子交換樹脂的色譜柱，然后洗脫吸附于樹脂上的蘋果酸，將得到的洗脫液減壓蒸餾，真空干燥，得到L-蘋果酸;

所述米曲霉為米曲霉(Aspergillus oryzae) ACCC30584，所述寄生曲霉為寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)CICC40365。

2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述米曲霉種子罐的培養基組分為：蔗糖3g，硝酸鈉0.2g，硫酸銨0.5g，磷酸二氫鉀0.1g，磷酸氫二鉀0.1g，一水硫酸錳0.1g，七水硫酸亞鐵0.01g，硫酸鎂0.01g，氯化鈉0.01g，pH值6.0。

3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述寄生曲霉種子罐的培養基組分為：木糖10g，硫酸銨0.5g，磷酸二氫鉀0.2g，磷酸氫二鉀0.1g，一水硫酸錳0.1g，七水硫酸亞鐵0.01g，硫酸鎂0.01g，pH值6.5。

4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述發酵罐培養基組分為：碳酸鈣80g/L，葡萄糖60g/L，木糖50 g/L，玉米漿12g/L，硫酸銨2g/L，硫酸鎂0.5 g/L，磷酸二氫鉀0.2g/L，磷酸氫二鉀0.1g/L，七水硫酸亞鐵0.01g/L，pH值6.2。