[發明專利]豬瘟-豬圓環二聯亞單位的疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710023628.7
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN107233566B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 錢泓;吳有強;查銀河
• 申請（專利權）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/187;A61K39/12;A61P31/20;A61P31/14
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產權代理有限責任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

本發明公開了一種豬瘟?豬圓環二聯亞單位的疫苗及其制備方法和應用，屬于動物疫苗與獸用生物制品技術領域。所述疫苗包含豬瘟病毒E2蛋白和豬圓環病毒2型Cap蛋白以及藥學上可以接受的佐劑。制備該疫苗的方法包括以下步驟：1)制備豬瘟病毒E2蛋白和豬圓環病毒2型Cap蛋白；2)將1)中制備的豬瘟病毒E2蛋白和豬圓環病毒2型Cap蛋白制備成抗原液；3)將抗原液與Montanide GEL 01PR佐劑按照質量比10:1混合攪拌。本發明的疫苗具有免疫原性強、安全性好、不存在免疫干擾、不會導致病毒變易的生物安全隱患、能夠從根本上凈化豬瘟病毒和豬圓環病毒2型等優點；且通過該疫苗進行免疫接種，能夠達到“一針兩防”的效果，省時、省力、節約成本。

技術領域

本發明涉及一種豬瘟-豬圓環二聯亞單位疫苗及其制備方法和應用，屬于動物疫苗與獸用生物制品技術領域。

背景技術

豬瘟是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一種急性、熱性、致死性疾病。豬瘟具有高度接觸傳染性、發病急、高熱稽留和小血管壁變性引起廣泛出血、梗塞和壞死等病變特征。家養豬和野生豬是其唯一的天然宿主。世界動物衛生組織(OIE)將其定為A類傳染病，我國《動物防疫法》將其列為一類傳染病。豬瘟是目前危害我國養豬業發展的主要疫病之一。

豬瘟病毒屬于黃病毒科、瘟病毒屬成員，為單鏈線狀RNA病毒。病毒粒子略呈圓形，具有脂蛋白囊膜，病毒粒子表面有脆弱的纖突結構。CSFV基因組全長約12.5kb，僅含有1個大的開放性閱讀框(ORF)，此ORF編碼約3898個氨基酸殘基、分子量約438kDa的多聚蛋白。此多聚蛋白在翻譯的同時和在翻譯后經病毒與宿主細胞蛋白酶加工成12種成熟蛋白，依次為Npro,C,Erns,E1,E2,p7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A,NS5B，其中C,Erns,E1和E2為結構蛋白,其余為非結構蛋白。E2是CSFV最主要的免疫原性蛋白，能夠誘導機體產生中和抗體并且能夠保護豬抵抗CSFV強毒株的攻擊，也是研究豬瘟基因工程疫苗的重要靶蛋白。

豬圓環病毒2型(Porcine circovirus,PCV-2)被認為是仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征(PMWS)、豬增生性壞死性肺炎(PNP)、豬皮膚與腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸系統疾病綜合征(PRDC)、豬繁殖障礙、豬先天性震顫及腸炎等疾病的主要病原，統稱為豬圓環病毒2型相關疾病，而且PCV-2感染還會引起免疫抑制，極易導致其它病原混合感染或繼發感染，是目前嚴重危害我國養豬業的病原之一。在我國，目前幾乎100％的豬場為豬圓環病毒2型陽性。

PCV2是目前已知的最小的病毒之一，其基因組是一條共價閉合單鏈DNA，約1.76kb～1.77kb。一般認為，PCV2僅有3個開放閱讀框(open reading frames，ORFs)可以編碼蛋白。其中ORF2又稱為Cap基因，位于互補鏈上，呈逆時針方向，負責編碼唯一的結構蛋白Cap蛋白，其氨基酸長度為233～234氨基酸殘基。Cap蛋白也是PCV2的主要抗原，能誘導中和抗體的產生并且能夠保護豬抵抗PCV2強毒株的攻擊，也是研究豬圓環病毒2型基因工程疫苗的重要靶蛋白。

在我們規模化養殖的發展中，由于頻繁引種、生物安全防范意識較差、管理不到位、人員專業素質較低等原因導致目前規模化豬場疾病多且雜，疫苗免疫仍是防治這些疾病爆發的首要選擇。因此，目前豬用疫苗很多，一頭商品豬在整個生長周期中，要進行多次免疫接種。在實際操作中，多針次、多劑量、多種疾病免疫程序難以合理安排，這樣既繁瑣、費時、費力、增加成本，而且容易造成遺漏，直接影響免疫效果和豬群的健康。因此，研究能同時預防2種或2種以上疾病的豬用疫苗是豬用獸用制品的一個發展方向。