[發明專利]抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制備治療肝癌藥物中的應用

有效

• 申請號: 201710022497.0
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106880833B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 丁國善;王全興;郭猛;劉芳;鮑蕾蕾;張銘健;展洋洋;曹雪濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K38/08
• 分類號: A61K38/08;A61K39/00;A61P35/00;C07K14/47
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

本發明涉及醫藥技術領域，具體是抗原肽RACGAP1?1和RACGAP1?2在制備預防和/或治療肝癌藥物中的應用，所述的抗原肽RACGAP1?1和RACGAP1?2的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。本發明提供的可用于肝癌治療的兩條抗原肽RACGAP1?1和RACGAP1?2，可以負載樹突狀細胞誘導并獲取大量具有特異性識別肝癌細胞的CTL，并可在體內顯著殺傷肝癌實體瘤，可用于制備預防或治療肝癌的藥物。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體地說，是抗原肽RACGAP1-1和RACGAP1-2在制備治療肝癌藥物中的應用。

背景技術

肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是一種起源于肝細胞的惡性腫瘤，是人類主要的惡性腫瘤之一，據世界衛生組織(WHO)報告，全世界每年有約100萬人死于肝癌。肝癌死亡率很高，我國肝癌發病率居世界之首,肝癌是我國第2位癌癥殺手，是全球第3位癌癥死因。器官移植是治療肝癌晚期唯一有效的手段，但仍存在供肝數量逐年減少以及急性、慢性排斥反應所導致的移植物存活時間短等諸多問題，放療、化療雖然一定程度上抑制腫瘤的生長和轉移，但對正常肝細胞造成的損傷以及復發率高的問題仍未得到有效解決。

近年來針對實體瘤的免疫治療逐漸成為腫瘤學研究的熱點。生物體對腫瘤細胞識別殺傷過程中，細胞免疫、特別是細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)發揮著核心作用。在此過程中，腫瘤細胞被抗原遞呈細胞(antigen-presenting cell，APC)吞噬后，其癌細胞特有的蛋白可以被蛋白酶水解形成肽段，并在內質網中與主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)I類分子結合，形成復合物，后被運送到細胞表面進行抗原遞呈，誘導特異性CTL增殖。CTL可以識別腫瘤細胞上的抗原肽與MHC的復合物，對腫瘤細胞進行殺傷。根據這一原理，可以通過選取腫瘤內特異性蛋白設計抗原肽，來誘導腫瘤特異性CTL。

隨著大數據時代的到來，循證醫學逐漸取代經驗醫學成為科學診斷和治療的切入點，以大數據為背景，進行科研研究逐漸成為主流。Oncomine、TCGA等含有大量腫瘤臨床樣本數據的數據庫得到國內外學者的廣泛關注，并越來越多的運用到腫瘤的研究中來，2013-2016年多篇研究工作發表在Nature、Science等頂級雜志。但是目前，利用大數據進行肝癌研究的多關注于肝癌發生發展過程中分子機制，而較少關注腫瘤抗原肽的開發。

發明內容

本發明根據現有肝癌公開數據，設計了一套利用差異分析挖掘肝癌高表達分子、后用ENCODE數據庫數據剔除可能引起自身免疫反應抗原的篩選方案。鑒于I型HLA中，位于HLA-A基因座0201型等位基因在人群中分布極為廣泛，其表達產物HLA-A*0201在腫瘤的抗原遞呈過程中起著非常重要的作用，且與HLA-A*0201發生結合的CTL表位長度被限制在9±1個氨基酸殘基。因此，本發明利用網絡軟件在線計算出潛在的抗原九肽，鑒定出在以HLA-A*0201陽性肝癌細胞癌患者為對象的免疫療法中有效的、與HLA-A*0201結合并遞呈在人CTL上的肽段。在裸鼠移植瘤模型中回輸負載后的腫瘤抗原肽后的樹突狀細胞(dendriticcell，DC)與T細胞，證明使用該肽有效。

本發明提供一種鑒定發現肝癌抗原肽的方法，具體是指通過公開的肝癌測序或芯片數據分析，篩選出肝癌高表達的基因，并通過ENCODE數據庫過濾表達于成年人其他組織中的分子，進而設計與HLA-A*0201發生結合的抗原九肽，負載DC誘導CTL后，通過體外殺傷實驗與裸鼠移植瘤模型篩選獲得有效的抗原肽。

本發明的主要技術方案如下：