[發明專利]呋喃西林代謝物SEM衍生化半抗原、人工抗原的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710022470.1
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106831498B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 李斌;胡睿
• 申請（專利權）人: 廣州潤坤生物科技有限公司
• 主分類號: C07C281/14
• 分類號: C07C281/14;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司 44218
• 代理人: 胡堅

本發明公開了一種呋喃西林代謝物SEM衍生化半抗原、人工抗原的制備方法及其應用，所述的半抗原引入的活性手臂，完整的保留了SEM衍生物的特征結構，對其電子云密度無影響，又具有可以與載體蛋白偶聯的活性基團，反應條件溫和，操作步驟簡單；制備的人工抗原可與抗體特異性的結合，具有高效價、高靈敏度、高精確性等特點，可快速檢測各類產品中呋喃西林代謝物SEM的殘留。

技術領域

本發明涉及免疫化學技術領域，尤其涉及一種呋喃西林代謝物SEM衍生化半抗原、人工抗原的制備方法及其應用。

背景技術

呋喃類是人工合成的一類共有5-硝基呋喃環結構的抗生素，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、部分真菌都具有抗菌效果。因價格低廉，被廣泛地應用在畜禽和魚類養殖中，用于治療由沙門氏桿菌、大腸桿菌引起的腸炎，球蟲病等，并且常作為畜牧動物以及水產魚蝦類的生長促進劑被添入飼料中。硝基呋喃類主要包括：呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃唑酮。但在食品安全中，呋喃西林的大量或連續使用不僅對養殖動物有毒性作用，而且具有致癌、致畸、致突變作用，其代謝物還對人類健康有惡性影響。因此，許多國家已經明令禁止在飼養動物源性食品過程中使用呋喃西林，并規定了在動物源性食品中的檢驗檢疫標準。

目前用于檢測呋喃西林及其代謝物的方法主要有傳統的檢測方法，如分光光度法、高效液相色譜法及其聯用技術等，以上方法雖然可以精確定量，但由于設備儀器昂貴，檢測時間長，且需專業人員操作，因此無法實現真正意義上的現場檢測；以及免疫學檢測技術，此方法具有高特異性和高選擇性的特點，非常適用于復雜基質痕量組分的分離或檢測，隨著學科間的相互滲透，其檢測方法層出不窮，應用范圍亦日益擴大，與傳統檢測方法相比，免疫學檢測技術具有經濟、快速、技術要點低、操作簡便等特點。免疫分析檢測技術是近年來在環境及食品檢測等領域開發出來的一種新型快速準確檢測方法，現已逐漸成為世界各國有毒有害殘留物快速篩選檢測的主要方法之一，也為呋喃西林的檢測提供了新的途徑。

雖然呋喃西林代謝物本身具有活性基團，但由于其分子量較小，空間結構不突出，直接制備的人工抗原存在靈敏度低的重大不足，無法滿足現有市場的需求。因此需先通過化學方法設計出其半抗原，再進一步與載體蛋白結合獲得具有免疫原性的完全抗原。

在專利公告號為“CN200710026406.7，CN201210049821.5”的專利文件中，其設計的半抗原結構為傳統的4-CP衍生物結構，均無法保留其待測目標物的硝基端，使得半抗原、抗原制備獲得的抗體均存在特異性差、親和力低等不足。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服傳統的SEM半抗原無法完整保留競爭物特征結構的缺陷，提供一種呋喃西林代謝物SEM衍生化半抗原、人工抗原的制備方法及其應用，其可保留競爭物硝基端的半抗原，人工抗原，提高競爭物的特異性。

本發明解決該技術問題所采用的技術方案是：一種呋喃西林代謝物的半抗原，為如下結構式Ⅲ：

本發明解決該技術問題所采用的另一技術方案是，一種呋喃西林代謝物的半抗原的制備方法，步驟如下：

(a)將化合物Ⅰ溶解于乙醇中，所得溶液通過添加6mol/L的氫氧化鋰溶液將PH值調至10-11，反應獲得化合物Ⅱ；

所述化合物Ⅰ的結構式為：

所述化合物Ⅱ的結構式為：

(b)將所述化合物Ⅱ與呋喃西林代謝物在甲醇條件下反應，既得呋喃西林代謝物的半抗原，其為如下結構式Ⅲ；

本發明解決該技術問題所采用的另一技術方案是，一種呋喃西林代謝物的半抗原的制備方法，步驟如下：