[發(fā)明專利]一種精漿超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710021045.0
• 申請(qǐng)日: 2017-01-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106770209A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸金春;劉園園;宰世鳳;盧坤剛;陳曉慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京欣迪生物藥業(yè)工程有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N21/75
• 分類號(hào): G01N21/75;G01N33/52;G01N35/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)32204
• 代理人: 柏尚春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及第二類體外診斷試劑，具體涉及一種精漿超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

精液中氧自由基和抗氧化劑的平衡是保持正常生育能力的基礎(chǔ)，這種平衡的打破可能是造成男性不育和精子質(zhì)量下降的重要原因。精漿中抗氧化酶主要包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(glutathione peroxidase，GPX)等。抗氧化酶的主要生理功能是防止氧自由基(reactive oxygen species，ROS)對(duì)細(xì)胞的損害，在正常情況下對(duì)細(xì)胞的生存也是必不可少的。ROS包括超氧化物陰離子(O₂^-)、過(guò)氧化氫(H₂O₂)和羥基(OH^-)，O₂^-是需氧代謝的副產(chǎn)物，它可以自動(dòng)歧化或被SOD轉(zhuǎn)化為H₂O₂，CAT或GPX則將H₂O₂轉(zhuǎn)為H₂O和O₂，從而清除ROS。在這三種主要的抗氧化酶中，SOD不僅自身能將O₂^-轉(zhuǎn)化為H₂O₂，而且對(duì)CAT或GPX將H₂O₂轉(zhuǎn)化為H₂O和O₂的反應(yīng)具有催化作用，因而在清除ROS的過(guò)程中具有關(guān)鍵的作用。當(dāng)精漿中SOD活性降低時(shí)，過(guò)多的氧自由基可使精子線粒體膜、精子質(zhì)膜發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化，從而影響精子活動(dòng)力，同時(shí)，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生的降解產(chǎn)物如丙二醛等，可抑制精子線粒體功能和包括腺苷酸環(huán)化酶在內(nèi)的多種酶的活性，從而影響精子的運(yùn)動(dòng)功能，導(dǎo)致男性不育。

目前臨床上尚缺乏精漿中超氧化物歧化酶的檢測(cè)方法，僅在一些科研文獻(xiàn)中報(bào)道過(guò)鄰苯三酚法、黃嘌呤氧化酶法、放射免疫分析法(RIA)和四唑鹽法(WST-1法)等檢測(cè)方法，且均為手工法，加樣程序多，操作步驟復(fù)雜，不但耗時(shí)耗力，而且人為誤差也比較大，因此大大限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。在血清超氧化物歧化酶的檢測(cè)中有應(yīng)用到全自動(dòng)生化分析儀，但是由于血清和精漿的組成和超氧化物歧化酶活性的差異，目前沒(méi)有文獻(xiàn)證明運(yùn)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中超氧化物歧化酶的試劑盒適用于檢測(cè)精漿中超氧化物歧化酶。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種精漿超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒，該試劑盒在檢測(cè)精漿超氧化物歧化酶時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)小、需要試劑量和樣本量少、結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度高，同時(shí)可與精漿生化的其他項(xiàng)目聯(lián)檢。

本發(fā)明還提供了一種精漿超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，該試劑盒可以在全自動(dòng)生化分析儀上應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述目的，如本發(fā)明所述的一種精漿超氧化物歧化酶，包括R1試劑、R2試劑、校準(zhǔn)品和凍干精漿質(zhì)控品；所述R1試劑為包含EDTA·2Na的Tris-HCl緩沖液；所述的R2試劑為包含鄰苯三酚的鹽酸溶液；所述校準(zhǔn)品為超氧化物歧化酶溶液；所述凍干精漿質(zhì)控品為定值的含超氧化物歧化酶的精漿凍干粉。

其中，所述R1試劑中EDTA·2Na的濃度為0.5～5.0mmol/L，Tris的濃度0.01～0.06mol/L，pH為8.0～8.5。

所述R2試劑中鄰苯三酚的濃度為0.5～2.5mmol/L，鹽酸的濃度為0.005～0.015mol/L。

所述校準(zhǔn)品活性為30U/mL和90U/mL。

所述超氧化物歧化酶溶液的溶劑為包含酶保護(hù)劑的磷酸鹽緩沖液，pH＝7.5～8.0，其中酶保護(hù)劑為D-海藻糖，濃度為0.15～0.5mol/L。選用pH＝7.5～8.0的磷酸鹽緩沖液時(shí)超氧化物歧化酶的活性最好；磷酸鹽緩沖液優(yōu)選由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉配制，其中緩沖液中磷酸根濃度為0.01～0.1mol/L。

所述凍干精漿質(zhì)控品在凍干前加入保護(hù)劑蔗糖、甘氨酸和NaCl，以及防腐劑山梨酸鉀，使蔗糖、甘氨酸、NaCl和山梨酸鉀的濃度分別為0.01～0.02mol/L、0.05～0.1mol/L、0.01～0.03mol/L和0.01～0.03g/dl，精漿已被檢定HBsAg、HCV抗體、HIV1+2抗體和梅毒均為陰性。

所述凍干精漿質(zhì)控品的定值范圍通過(guò)以下步驟獲得：