[發明專利]一種豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710019644.9
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108303540B
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 宋啟超;左青山;紀良心;劉聰;李炎暉
• 申請（專利權）人: 上海鳴捷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京深川專利代理事務所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

本發明公開了一種豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒及其檢測方法，本發明的試劑盒采用磁性微粒包被的抗原、發光標記物標記的蛋白與待測樣本中的抗體發生特異性反應而進行待測樣品中抗體含量的測定。本發明的試劑盒實現豬偽狂犬gE抗體的定性檢測，靈敏度高，檢測范圍寬，快速，重復性好，全自動操作及高通量檢測的效果。

技術領域

本發明涉及豬偽狂犬gE抗體檢測技術領域，尤其涉及一種豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒及采用該試劑盒進行檢測的檢測方法。

背景技術

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病毒(Pseudorabies?Virus，PRV)引起的一種急性傳染病。成年豬常為隱形感染，妊娠母豬感發生流產、產死胎和木乃伊胎；偽狂犬病病毒先天感染或早期感染引哺乳仔豬的神經癥狀和高死亡率；對于保育豬和育肥豬，偽狂犬病毒是呼吸系統疫病綜合征(PRDC)的重要病原，引起其呼吸系統癥狀和生長遲緩。本病在我國廣泛存在，是重要的傳染病之一。動物一旦被感染，病毒可在體內呈長期潛伏感染狀態，可在體內存活數年甚至終生，難以清除。在一定條件下，病毒還可以被重新激活而排毒傳播。因此，該病的凈化和根除十分重要。

在我國，免疫接種是防治偽狂犬病的主要策略。目前市場上使用的豬偽狂犬疫苗絕大多數是缺失gE基因與TK基因的弱毒疫苗。疫苗免疫后，動物機體內不能檢測到針對gE蛋白的抗體，而野生毒株含有gE基因，因此，可檢測血清樣品中是否含有gE抗體來判斷是否被野毒感染。

目前建立并應用的豬偽狂犬gE抗體檢測方法有ELISA方法、乳膠凝集實驗、膠體金試紙條等方法。ELISA方法目前是豬偽狂犬gE抗體最常用的方法，ELISA所測OD值的范圍在0.1-3.5，靈敏度低，反應的時間通常在2小時左右，時間較長；乳膠凝集實驗是通過偽狂犬抗原和抗體能否產生凝集來判定，靈敏度、準確度均不是很高，應用較少；膠體金方法能快速得出結果，但是靈敏度低，限制了應用范圍。

發明內容

為了解決現有獸醫檢測技術中存在的檢測時間長、靈敏度低、重復性差、難以自動化等的問題，本發明的目的是提供一種豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒，它可以快速、靈敏地檢測豬偽狂犬gE抗體。為此，本發明還提供一種利用該試劑盒進行檢測的方法，本發明的檢測方法靈敏度高、檢測時間短、重復性好。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案：

本發明的第一方面，提供一種豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒，包括豬偽狂犬gE蛋白偶聯或間接偶聯磁性微粒的溶液，發光標記物標記的蛋白溶液和發光底物。

其中，所述的偶聯包括通過磁性微粒羧基與蛋白氨基縮合形成酰胺、磁性微粒氨基與蛋白氨基通過戊二醛交聯形成五碳橋、甲苯磺酰基磁性微粒與蛋白氨基共價偶聯相連接。

其中，所述的間接偶聯包括通過以下方式介導的偶聯：鏈霉親和素-生物素介導的偶聯、抗FITC抗體-FITC偶聯。

其中，所述豬偽狂犬gE蛋白偶聯磁性微粒的溶液的制備方法包括如下步驟：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用緩沖液清洗磁性微粒，并懸浮于緩沖液中；

S2，加入純化的豬偽狂犬gE蛋白；

S3，加入交聯劑或催化劑，振蕩反應；

S4，磁鐵吸附磁性微粒，洗滌，懸浮在含有封閉劑的溶液中。

其中，所述磁性微粒的溶液與豬偽狂犬gE蛋白的比例為10mg:0.5-5.5nmol。

優選的是，所述磁性微粒的溶液與豬偽狂犬gE蛋白的比例為10mg:1-3nmol。

其中，所述豬偽狂犬gE蛋白間接偶聯磁性微粒的溶液的制備方法包括如下步驟：

1)磁性微粒結合親和素