[發明專利]利用HLA?G分子及其抗原片段制備預防腫瘤和病毒病的廣譜疫苗及其應用

在審

• 申請號: 201710018152.8
• 申請日: 2017-01-10
• 公開（公告）號: CN106632661A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 蘇殿杰
• 申請（專利權）人: 天津東亞生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/74
• 分類號: C07K14/74;A61K39/00;A61K39/12;A61P31/12;A61P35/00
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司12211
• 代理人: 李莎

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域。具體涉及利用HLA-G氨基酸序列的抗原片段制備廣譜疫苗的應用及方法，該廣譜疫苗可用于預防人體或動物體的腫瘤和病毒引起的疾病。

背景技術

惡性腫瘤是威脅人類健康和生命的主要疾病之一，其發病率逐年增高并且趨向年輕化。據世界衛生組織1997年報告，當時全球腫瘤患者每年死亡人數高達660萬，預計到2020年全球腫瘤患者將達到1500萬。最新統計資料顯示，近20年來，中國每4至5個死亡者中就有一個死于癌癥，癌癥已成為人類第一殺手。

腫瘤來勢洶涌，人心惶惶，在治療腫瘤有效藥物研制成功之前，預防腫瘤成為極大的健康需求。然而目前全世界尚未有效的預防腫瘤的技術，研發預防腫瘤先進的方法和技術是及其迫切的任務。

新的病毒或未知病毒不斷出現，一次又一次地給人類帶來嚴重災害。雖然人類尚未研制出治療病毒感染的有效藥物，但是如何預防病毒感染，特別是預防未知病毒或所有病毒的感染更為重要。盡管人類研制出預防某些病毒的疫苗，但是研制預防未知病毒或所有病毒的廣譜疫苗尤其重要，至今未人涉足。如果能研制出預防未知病毒或所有病毒的疫苗，將能抗拒未知病毒或所有病毒對人類的襲擊。人類期盼預防未知病毒或所有病毒的疫苗早日問世。

HLA-G是非經典的HLA I類分子。HLA-G于1987年由Geraghty等克隆并證實。HLA-G分子具有直接抑制多種免疫活性細胞的生物功能，是機體一個重要的免疫耐受分子，在母胎免疫、腫瘤免疫、移植免疫、自身免疫、及感染免疫中發揮十分重要的作用。研究證實，在腫瘤免疫中，HLA-G能夠抑制NK細胞、T細胞和樹突狀細胞，使機體的免疫系統處于抑制狀態。由于HLA-G對機體的免疫抑制作用，使腫瘤細胞能夠逃脫機體對腫瘤細胞的免疫監控，實現了腫瘤細胞免疫逃逸，腫瘤細胞獲得了自由瘋狂生長的機會。

腫瘤切片的免疫組化染色結果表明，在喉癌、食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宮癌等多種惡性腫瘤組織中都能表達HLA-G。另外，在HBsAg、HCAg、HIV、SARS、埃博拉、寨卡等病毒攜帶者的血液樣本中，HLA-G的檢測結果均呈陽性。說明HLA-G在腫瘤組織和病毒性疾病的血液中的表達具有普遍性，使得HLA-G有望成為所有腫瘤細胞和病毒的共同靶標，并有望作為免疫原在預防腫瘤和病毒性疾病方面發揮作用。但是，采用HLA-G全分子制備廣譜疫苗需要經過基因雜交、表達、純化等多道復雜工序，上游工作量大且成本高昂，不利于疫苗的普及生產和應用。

免疫原的決定簇部位決定著抗原物質在免疫應答中的特異性，每個免疫原分子中均存在有多種或多個決定簇，這些源自腫瘤或病毒性疾病相關的HLA-G分子的決定簇均有望以多肽片段的形式作為免疫原性肽被應用于肽疫苗的活性藥物成分之中。但是，由于免疫應答細胞對不同特定部位的決定簇具有不同程度的親和性，并且免疫原性肽的多肽片段在形成疫苗的過程中也可能隨著結構復雜性的降低而導致免疫原性降低，目前已知的HLA-G分子抗原決定簇并不能為制備廣譜疫苗提供準確有效的應用信息。

發明內容

本發明首先提供了一種抗原片段，包括下述至少一種氨基酸序列：

(1)YW EEE TRN TKA HA(SEQ ID NO:1)；

(2)RGY YNQ SEA SSH TL(SEQ ID NO:2)；

(3)PPK THV THH PVFD(SEQ ID NO:3)；

(4)PLM LRW KQS SL(SEQ ID NO:4)。

其中，所述抗原片段與HLA-G氨基酸序列中任意一段包含至少一種上述氨基酸序列(SEQ ID NO:1-4)的多肽片段、或該多肽片段的同源物、類似物或衍生物的序列相同。該抗原片段的序列可以是人工合成的；也可以優選的是將HLA-G氨基酸序列通過各種方式的縮短剪切而獲得的，該HLA-G氨基酸序列可以是對天然序列經人工分離、或通過基因重組及表達的人工合成等方式而獲得。

進一步，所述HLA-G氨基酸序列包括HLA-G分子各異構體氨基酸序列、以及該HLA-G分子各異構體氨基酸序列的保守性變體、生物活性片段或衍生物。目前，已知的HLA-G天然分子具有7種異構體，這7中異構體中具有4種不同的氨基酸序列(SEQ ID NO:5-8)，該4種不同的氨基酸序列(SEQ ID NO:5-8)均可作為所述HLA-G氨基酸序列的一種優選的選擇。