[發明專利]一種膽固醇-Biotin分子探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710017878.X
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN106831925B
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 仇文衛;宋保亮;肖旭;汪炎;唐靜潔;王李婷;楊連芳
• 申請（專利權）人: 華東師范大學;武漢大學
• 主分類號: C07J43/00
• 分類號: C07J43/00;G01N33/68
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

本發明公開了一種膽固醇?Biotin分子探針及其制備與應用，以膽固醇分子探針(Azide?probe)為原料，經羥基保護、還原、與Biotin縮合、脫保護反應后，得到如式(1)所示的膽固醇?Biotin分子探針。本發明的制備方法，具有反應條件溫和、合成方法簡便特點。本發明還公開了所述膽固醇?Biotin分子探針在鑒定膽固醇結合蛋白的應用。

技術領域

本發明屬于生物、醫藥及其制備和應用的技術領域，具體涉及一種膽固醇-Biotin分子探針及其制備、以及其在鑒定膽固醇結合蛋白過程中的應用。

背景技術

膽固醇是一種環戊烷多氫菲的衍生物具有雙極性的特點。膽固醇作為重要的營養物質，其具有組成細胞膜，調節細胞膜流動性，合成激素等生理作用，并且膽固醇的衍生物具有調控信號通路的功能。膽固醇結合蛋白功能發生紊亂，會導致多種疾病。研究膽固醇結合對蛋白活性的影響以及鑒定新的膽固醇結合蛋白對完善信號通路過程的理解以及對膽固醇結合蛋白調控相關疾病的治療具有重要意義。但由于膽固醇分子的雙極性分子特征，一直沒有好的鑒定膽固醇結合蛋白的方法報道。本發明開發的膽固醇‐Biotin探針用來鑒定膽固醇結合蛋白是一條可行路線，并且具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種可用于鑒定膽固醇結合蛋白的膽固醇分子探針。

本發明提出的膽固醇-Biotin分子探針(膽固醇-生物素分子探針)，其結構式如式(1)所示，

本發明還提出了該膽固醇-Biotin分子探針的制備方法，以式(a)膽固醇分子探針(Azide-probe)為原料，經羥基保護反應、還原反應、與Biotin縮合反應、脫保護反應，得到如式(1)所示的膽固醇-Biotin分子探針，反應過程如路線(1)所示：

具體包括：

(1)羥基保護反應

所述羥基保護所用試劑包括叔丁基二甲基氯硅烷(TBSCl)、咪唑，反應溶劑為DMF，反應溫度為室溫25℃。

在室溫25℃條件下，在DMF中，式(a)膽固醇分子探針(Azide-probe)與叔丁基二甲基氯硅烷、咪唑發生羥基保護反應，得到式A1化合物。

所述式(a)膽固醇分子探針(Azide-probe)與叔丁基二甲基氯硅烷、咪唑的摩爾比為1：3：5。

(2)還原反應

還原反應試劑三苯基膦(PPh₃)和H₂O(水參與反應過程)，溶劑為THF，反應溫度為室溫25℃；

在室溫25℃條件下，在THF和H₂O中，式A1化合物與三苯基膦發生還原反應，得到式A2化合物。

所述式A1化合物與三苯基膦和水的摩爾比為1：1.5：20。

(3)縮合反應

所述縮合反應試劑為式(b)(+)-生物素-N-羥基琥珀酰亞胺酯(Biotin-OSu)、三乙胺(Et₃N)，溶劑為DMF，反應溫度為室溫25℃；

在室溫25℃條件下，在DMF中，式A2化合物與式(b)Biotin-OSu、三乙胺，發生縮合反應，得到式A3化合物。

所述式A2化合物與式(b)Biotin-OSu、三乙胺的摩爾比為1:1.5:2。

(4)脫保護反應

所述脫保護反應所用試劑包括鹽酸四氫呋喃溶液、鹽酸乙酸乙酯、鹽酸乙醇溶液，反應溫度為室溫25℃。