[發明專利]一種油菜遺傳轉化的方法

有效

• 申請號: 201710015224.3
• 申請日: 2017-01-10
• 公開（公告）號: CN106591357B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 劉昱輝;李梅;賈士榮;王志興
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種油菜遺傳轉化方法。該方法依次包括如下步驟：(1)將含有目的基因的重組表達載體導入農桿菌，得到重組農桿菌；(2)取重組農桿菌，對油菜的外植體進行侵染；(3)取所述外植體，置于共培養培養基，進行共培養；(4)取所述外植體，置于選擇培養基，進行培養；(5)取所述外植體，置于分化培養基進行培養，獲得分化芽；(6)取所述分化芽，置于生根培養基進行培養，獲得轉基因油菜。實驗證明，采用本發明提供的方法進行油菜遺傳轉化，轉化效率高(達12.0％?12.5)，耗時短，為油菜轉基因提供了強大的工具，具有非常重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種油菜遺傳轉化的方法。

背景技術

油菜是重要的油料作物。20世紀70年代前，油菜的遺傳改良都是通過雜交、誘變等傳統育種方法來實現的。自1985年首次利用根癌農桿菌介導法獲得轉基因甘藍型油菜以來，油菜的轉基因研究迅速發展，特別是近年來基因重組和轉基因技術的出現，更是為油菜的遺傳改良開辟了新的路徑。然而，廣泛栽培的油菜品種中還沒有一種已建立較為理想的轉化體系。油菜遺傳轉化效率低已經成為制約油菜功能基因組學研究和油菜轉基因研究的瓶頸問題。目前常用的油菜品種是歐洲型油菜模式品種Westar，其獲得轉基因植株需要6-8周，轉化效率約為0.8％。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供轉化效率較高的油菜遺傳轉化方法。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了一種油菜遺傳轉化方法。

本發明所提供的油菜遺傳轉化方法，依次可包括如下步驟：

(1)將含有目的基因的重組表達載體導入農桿菌，得到重組農桿菌；

(2)取步驟(1)得到的重組農桿菌，對油菜的外植體進行侵染；

(3)完成步驟(2)后，取所述外植體，置于共培養培養基，進行共培養；

(4)完成步驟(3)后，取所述外植體，置于選擇培養基，進行培養；

(5)完成步驟(4)后，取所述外植體，置于分化培養基進行培養，獲得分化芽；

(6)完成步驟(5)后，取所述分化芽，置于生根培養基進行培養，獲得轉基因油菜。

上述方法中，所述共培養培養基中含有1.0-1.5mg/L 1-萘乙酸、4.0-6.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和4.0-6.0mg/L AgNO₃。所述選擇培養基中含有0.8-1.2mg/L 1-萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和80-120mg/L頭孢噻吩。所述分化培養基中含有0.1-0.3mg/L 1-萘乙酸、1.0-3.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、30-50mg/L卡那霉素和80-120mg/L頭孢噻吩。所述生根培養基中含有80-120mg/L卡那霉素和80-120mg/L頭孢噻吩。

所述共培養培養基具體可為含有1.25mg/L 1-萘乙酸、5.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和5.0mg/L AgNO₃的MS₀培養基。所述選擇培養基具體可為含有1.0mg/L 1-萘乙酸、3.0mg/L6-芐氨基腺嘌呤和100mg/L頭孢噻吩的MS₀培養基。所述分化培養基具體可為含有0.2mg/L1-萘乙酸、2.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、40mg/L卡那霉素和100mg/L頭孢噻吩的MS₀培養基。所述生根培養基具體可為含有100mg/L卡那霉素和100mg/L頭孢噻吩的MS₀培養基。

上述方法中，所述步驟(2)中，所述油菜的外植體可為所述油菜的子葉。