[發明專利]一種葡萄糖腦苷脂酶基因檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710014589.4
• 申請日: 2017-03-27
• 公開（公告）號: CN106906280B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 鄭文彥;黃源堅;王邦超;杜蔚安;高靜;彭百華;周玉;吳智鋒
• 申請（專利權）人: 廣東華美眾源生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 王國標

本發明提供了一種葡萄糖腦苷脂酶基因檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒包括用于特異性識別葡萄糖腦苷脂酶基因上4個多態性位點的Taqman探針及用于擴增多態性位點所在基因片段所對應的引物對，4個多態性位點分別為N188S、F213I、D409H和L444P，所述Taqman探針包括野生型探針和突變型探針，所述引物對包括上游引物和下游引物。應用本發明的檢測試劑盒可以快速高效檢測葡萄糖腦苷脂酶基因4個多態性位點的基因型，是一種快速、簡便、經濟、高效的葡萄糖腦苷脂酶缺乏癥基因檢測試劑盒。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別涉及一種葡萄糖腦苷脂酶基因檢測試劑盒，及其檢測方法。

背景技術

編碼葡糖腦苷脂酶的基因(Glucocerebmsidas，以下簡述GBA)突變會造成該酶的缺乏，從而引起葡糖腦苷脂在肝、脾、骨骼和中樞神經系統的單核-巨噬細胞內蓄積而發病，產生肝脾腫大、骨骼畸形、生長發育落后、貧血等臨床表現。

然而目前檢測GBA的主要技術為基因測序，存在低通量、操作復雜、耗時長等缺點。

熒光定量PCR技術是一項發展較為成熟的核酸檢測方法。其優勢在于：操作簡便，因閉管操作可以減少污染，結果分析快捷。其中Taqman探針技術是一種通過檢測聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，以下簡稱PCR)過程中產生的熒光信號來區分等位基因類型的基因檢測技術。針對待檢測的基因位點，設計一對Taqman探針及其對應上下游引物，所述探針對分別檢測目標位點的兩種等位基因。每條探針的5'端標記熒光報告基團，3’端標記淬滅基團。在PCR擴增過程中，利用Taq酶5’端核酸酶活性降解因與目標序列完全互補而結合在單鏈上的探針，令熒光基團與淬滅基團分離從而產生熒光。若探針與目標序列存在錯配，則不能與單鏈結合，亦不會產生熒光。因此通過熒光定量PCR儀收集PCR擴增期間熒光信號的變化，可以判別檢測樣本的基因型。Taqman探針技術最突出的優點是不需要分離或洗脫等PCR后處理過程，簡化操作流程并提高了檢測速度。

發明內容

本發明旨在提供一種高準確性、低成本、高通量、快速的檢測試劑盒，可用于檢測葡糖腦苷脂酶基因是否存在突變。

本發明所采取的技術方案是：

一種葡萄糖腦苷脂酶基因檢測試劑盒，包括用于特異性識別葡萄糖腦苷脂酶基因上4個多態性位點的Taqman探針及用于擴增多態性位點所在基因片段所對應的引物對，4個多態性位點分別為N188S、F213I、D409H和L444P。

所述Taqman探針包括野生型探針和突變型探針，對應4個多態性位點的野生型探針和突變型探針如下表所示：

表1、各個多態性位點的探針序列

W代表野生型特異探針，M代表突變型特異探針。

Taqman探針的5'端標記有熒光報告基團、3'端標記有淬滅基團，所述熒光報告基團是FAM、VIC、TAMRA或ROX中的一種，所述淬滅基團是BHQ-1或BHQ-2。

所述引物對包括上游引物和下游引物，對應4個多態性位點的上游引物和下游引物如下表所示：

表2、各個多態性位點的引物序列

F代表上游引物，R代表下游引物。

優選地，所述引物對以2個多態性位點為一組進行復合擴增。所述多態性位點的分組為：第一組，N188S、F213I；第二組，D409H、L444P。