[發明專利]一種環狀轉座子復合物及其應用有效
| 申請號： | 201710013203.8 | 申請日： | 2017-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN106801044B | 公開（公告）日： | 2021-03-23 |
| 發明（設計）人： | 耿亮;祝珍;辛文 | 申請（專利權）人： | 北京全式金生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/12 | 分類號： | C12N9/12;C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司 11257 | 代理人： | 張文祎;趙曉丹 |
| 地址： | 100192 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 環狀 座子 復合物 及其 應用 | ||
1.一種環狀轉座子復合物，其特征在于：所述環狀轉座子復合物包含Tn5轉座酶和插入DNA；所述插入DNA包含轉座子末端序列、2個標簽序列和含酶切位點的DNA序列；其中，所述插入DNA兩端為轉座子末端序列，在轉座子末端序列內側則是2個標簽序列；所述2個標簽序列之間為含酶切位點的DNA序列，所述環狀轉座子復合物有且僅有一個插入DNA。
2.根據權利要求1所述的環狀轉座子復合物，其特征在于：所述含酶切位點的DNA序列為含U的單鏈或雙鏈DNA序列、含限制性酶切位點的DNA序列或含有不互補堿基對的雙鏈DNA序列。
3.權利要求1-2任一所述環狀轉座子復合物在構建DNA文庫中的應用。
4.一種DNA文庫的構建方法，其特征在于，該方法包括：獲取靶DNA；制備環狀轉座子復合物：所述環狀轉座子復合物包含Tn5轉座酶和插入DNA；將靶DNA與環狀轉座子復合物孵育，酶解反應；即得DNA文庫；
所述插入DNA包含轉座子末端序列、2個標簽序列和含酶切位點的DNA序列；其中，所述插入DNA兩端為轉座子末端序列，在轉座子末端序列內側則是2個標簽序列；所述2個標簽序列之間為含酶切位點的DNA序列，所述環狀轉座子復合物有且僅有一個插入DNA。
5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于：所述含酶切位點的DNA序列為含U的單鏈或雙鏈DNA序列、含限制性酶切位點的DNA序列或含有不互補堿基對的雙鏈DNA序列。
6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于：當所述2個標簽序列之間的DNA序列為含U的單鏈或雙鏈DNA序列，加入UDG酶進行酶解反應；
當所述2個標簽序列之間為含限制性酶切位點的DNA序列，加入限制性內切酶進行酶解反應；
當所述2個標簽序列之間為含有不互補堿基對的雙鏈DNA序列，加入核酸外切酶進行酶解反應。
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