[發(fā)明專利]利用藍藻泥培養(yǎng)木霉菌的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710012606.0
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN106754420B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設計）人: 詹曉北;吳劍榮;劉和;鄭志永
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/885
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 楊慧林

本發(fā)明涉及一種利用藍藻泥培養(yǎng)木霉菌的方法，包括以下步驟：將藍藻泥復溶后進行破壁處理，然后加入中性蛋白酶，在40?50℃下水解2?4h，再加入堿性蛋白酶，在50?55℃下水解2?5h，得到藍藻泥水解液；將藍藻泥水解液配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，將木霉菌接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，進行發(fā)酵培養(yǎng)。本發(fā)明以藍藻泥為原料，對藍藻泥進行資源化利用，經(jīng)蛋白酶處理后獲得富含短肽/氨基酸的藍藻水解液，制成培養(yǎng)基后所培養(yǎng)的木霉菌，可以直接用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。

技術領域

本發(fā)明涉及資源再生利用和生物工程技術領域，尤其涉及一種利用藍藻泥培養(yǎng)木霉菌的方法。

背景技術

藍藻是一類革蘭氏陰性、無鞭毛、含葉綠素a、不形成葉綠體、能進行產(chǎn)氧性光合作用的原核生物。近年來，太湖、滇池、巢湖等地藍藻爆發(fā)頻繁，大量藍藻被打撈上來，耗費大量人力和財力。但是撈起來的藍藻含水達到98％以上，不能保存，如果不及時處理會發(fā)臭，進而引起二次污染。

目前對藍藻泥常見的處理方法包括：(1)堆肥處理：可降解藻毒素，但是農(nóng)民不喜歡用，而且使用時與農(nóng)作物季節(jié)上不匹配；(2)發(fā)酵產(chǎn)沼氣：可與豬糞等垃圾一起發(fā)酵沼氣，但是由于含碳低，產(chǎn)沼氣量少，沼渣可產(chǎn)生二次污染；(3)烘干處理供進一步利用：已有用作可降解塑料原料的報道，但是烘干成本較高，做成塑料后其臭味難除、且賣價不高，難以抵消打撈烘干成本；(4)提取藻膽蛋白、藻毒素、色素、多糖等，但是純化成本很高；(5)用做蘑菇栽培配料或者養(yǎng)酵母單細胞蛋白培養(yǎng)，但是藻毒素無法去除，附加值不高；(6)培養(yǎng)蘇云金芽孢桿菌生產(chǎn)生物殺蟲劑，屬于直接發(fā)酵藍藻泥，藍藻營養(yǎng)利用不夠充分。

藍藻水華爆發(fā)具有突發(fā)性，主要在每年5～9月，處理時需要迅速從湖中撈起藍藻。但是藍藻量太大，如果無法立即全部處理，由于藍藻富含營養(yǎng)(高達40％以上蛋白含量)，會發(fā)生腐敗引發(fā)惡臭和二次污染。為了有效利用藍藻，目前已成功開發(fā)烘干技術，把藍藻干燥形成水分約為5～30％的藍藻泥/粉，這樣藍藻就不會發(fā)臭，且體積大大縮小，有利于后期藍藻利用。但是，目前針對藍藻泥/粉進行高附加值產(chǎn)品開發(fā)的工藝技術還不成熟。例如，專利申請?zhí)枮?01110430308.6的中國專利以藍藻和稻草為原料生產(chǎn)食用雙孢菇，但是藍藻必須添加銅綠假單胞菌和鞘氨醇單胞菌進行好氧發(fā)酵處理以脫除藍藻毒素。專利申請?zhí)枮?01510865971.7的中國專利直接以新鮮藍藻沼液為原料用于培養(yǎng)蘇云金芽胞桿菌作為生物殺蟲劑，但該技術用于處理不定期爆發(fā)的水華藍藻比較困難。另外，中國專利201610320145.9公開了將藍藻藻泥和秸稈、鈣肥等按照一定比例進行堆肥發(fā)酵制成有機肥，再與尿素、氯化銨、氯化鉀、凹凸棒土按照一定比例混合制成復合微生物肥料的技術。而以上公開技術中，水華藍藻的資源化處理工藝產(chǎn)品的附加值均不高。

木霉屬于半知菌門，絲孢目，木霉屬，常見的木霉有綠色木霉、康寧木霉、哈茨木霉等。木霉菌對植物病原菌的拮抗作用具有多種機制，一般認為其機制包括競爭、重寄生、協(xié)同拮抗、抗生、誘導抗性等。綠色木霉、哈茨木霉等木霉菌已批準作為農(nóng)業(yè)生防菌，生產(chǎn)的木霉菌劑主要是分生孢子劑；由于木霉菌是對環(huán)境無污染的友好菌，在綠色農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中越來越受到青睞。木霉含有豐富的蛋白酶、淀粉酶等酶系，如Lee等篩選出一株具有強大淀粉水解能力的木霉J113，可用于水解螺旋藻多糖(Bioenerg.Res.(2015)8:1868–1876)。但是，目前生防木霉菌的培養(yǎng)主要依靠糧食原料，如玉米、馬鈴薯等，其培養(yǎng)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種利用藍藻泥培養(yǎng)木霉菌的方法，本發(fā)明以藍藻泥為原料，對藍藻泥進行資源化利用，經(jīng)蛋白酶處理后獲得富含短肽/氨基酸的藍藻水解液，制成培養(yǎng)基后所培養(yǎng)的木霉菌，可直接用作農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的生防菌，防止植物病害。

本發(fā)明提供了一種利用藍藻泥培養(yǎng)木霉菌的方法，包括以下步驟：

(1)將藍藻泥與水按5-10:1復溶后進行破壁處理，然后加入中性蛋白酶，在40-50℃下水解2-4h，再加入堿性蛋白酶，在50-55℃下水解2-5h，得到藍藻泥水解液；