[發(fā)明專利]用于線粒體全基因組檢測(cè)的引物組合及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710012346.7
• 申請(qǐng)日: 2017-01-09
• 公開（公告）號(hào): CN106755456B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周仲春;葉建偉;張捷;崔丹;劉棒;余應(yīng)襄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京圣谷智匯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11489
• 代理人: 柴智敏

1.線粒體全基因組檢測(cè)的引物組合，包括6組擴(kuò)增引物對(duì)，分別是：

用于擴(kuò)增m.14835-m.1691區(qū)域MC1的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC1-F：GATGAAACTTCGGCTCACTCCT

MC1-R：GGGTTTGGGGCTAGGTTTAGC；

用于擴(kuò)增m.1216-m.3959區(qū)域MC2的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC2-F：CGATAAACCCCGATCAACCTCA

MC2-R：CCTGCGGCGTATTCGATGTT；

用于擴(kuò)增m.3706-m.6808區(qū)域MC3的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC3-F：CGAGCAGTAGCCCAAACAATC

MC3-R：GTGTGTCTACGTCTATTCCTACTG；

用于擴(kuò)增m.6418-m.9776區(qū)域MC4的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC4-F：AACCCCCTGCCATAACCCA

MC4-R：TCGGAAATGGTGAAGGGAGA；

用于擴(kuò)增的m.8963-m.12214區(qū)域MC5的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC5-F：ATCAGCCTACTCATTCAACCAA

MC5-R：GCTTTCTCGGTAAATAAGGGGT；

用于擴(kuò)增m.11965-m.15364區(qū)域MC6的引物對(duì)，其堿基序列為：

MC6-F：CACAGCCCTATACTCCCTCTACAT

MC6-R：GTTTGATCCCGTTTCGTGCAA。

2.線粒體全基因組檢測(cè)的擴(kuò)增反應(yīng)體系，所述擴(kuò)增反應(yīng)體系包含6個(gè)單獨(dú)的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中每個(gè)單獨(dú)的擴(kuò)增反應(yīng)體系分別包含權(quán)利要求1引物組合中的一組引物對(duì)、聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液、dNTP和模板DNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中所述聚合酶是熱啟動(dòng)Taq酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求2的擴(kuò)增反應(yīng)體系，其中所述反應(yīng)體系的體積為25μl-50μl。

5.線粒體全基因組檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求1的引物組合。

6.權(quán)利要求1的引物組合或權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的擴(kuò)增反應(yīng)體系在制備用于檢測(cè)線粒體全基因組的試劑中的應(yīng)用。

7.線粒體全基因組檢測(cè)方法，包括以下步驟：

(1)制備權(quán)利要求2-4任一項(xiàng)的擴(kuò)增反應(yīng)體系；

(2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增程序是：在95℃變性5-15分鐘；然后進(jìn)行30-35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)中94℃變性30秒，然后60-65℃退火30-90秒，然后60-72℃延伸60-180秒；最后在60-72℃延伸10-30分鐘；

其中所述方法為非診斷目的。

8.權(quán)利要求7的線粒體全基因組檢測(cè)方法，還包括步驟(3)：對(duì)擴(kuò)增獲得的序列進(jìn)行測(cè)序。

9.權(quán)利要求8的線粒體全基因組檢測(cè)方法，其中所述測(cè)序是Sanger測(cè)序。