[發明專利]一種乙型腦炎病毒的保護性單克隆抗體及其抗原位點的應用

有效

• 申請號: 201710011901.4
• 申請日: 2017-01-08
• 公開（公告）號: CN106939046B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 宋云峰;裴超;周登元;劉朝霞;曹勝波;邵彥春;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N5/20;C07K14/18;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發明屬于動物傳染病防治技術領域，具體涉及一種乙型腦炎病毒的保護性單克隆抗體及其抗原位點的應用。制備得到一種由保藏編號為CCTCC NO：C201699的JEV NS1雜交瘤細胞株2B8分泌的對乙型腦炎病毒NS1蛋白的保護性單克隆抗體。所述的單克隆抗體能識別NS1蛋白中的225位WPETHTLWGD234位的氨基酸片段，該片段的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本發明還公開了一種對乙型腦炎病毒NS1蛋白具有保護作用的多肽，該多肽的氨基酸序列為WPETHTLWGD。生物功能驗證表明本發明的單克隆抗體可在制備治療和預防乙型腦炎病毒疫苗中的應用。

技術領域

本發明屬于動物傳染病防治技術領域，具體涉及一種針對乙型腦炎病毒NS1蛋白的保護性單克隆抗體及其對應抗原位點的應用

背景技術

乙型腦炎病毒不僅引起人的中樞神經系統疾病，還可引起豬的繁殖障礙性疾病，是一種重要的人畜共患傳染病病原。乙型腦炎病毒主要侵入神經系統，包括丘腦，基底神經節，腦干，小腦，大腦皮層和脊髓，導致嚴重的中樞神經系統疾病，例如脊髓灰質炎樣嚴重癱瘓，無菌性腦膜炎和腦炎，71％的患者都是基底神經節和丘腦損傷，嚴重出現運動障礙，43％患者腦干損傷，經常出現急性呼吸衰竭癥狀，甚至死亡?；颊叩牟∷缆逝c臨床癥狀高達10％～50％，而且大約一半乙型腦炎病毒感染幸存者都有嚴重的神經后遺癥。在亞洲每年大約50,000乙腦病例中就有15,000例死亡。2006年7月山西發生日本乙型腦炎流行，共60多人發病，其中19人死亡，造成了較大的社會影響。

目前已應用的乙型腦炎病毒疫苗為弱毒疫苗和滅活疫苗。其中滅活疫苗是世界衛生組織推薦的在全球應用的疫苗，雖然該疫苗具有較高的安全性，但是在免疫保護力上卻不夠理想，經常出現免疫失敗的報道。乙型腦炎病毒弱毒疫苗由我國自行研制，該疫苗具有較高的免疫保護效率，但是由于安全性不夠高，目前僅在我國使用，同時兒童是我國乙型腦炎病毒的主要免疫人群，考慮到安全性問題，兒童使用的疫苗仍以滅活疫苗為主。因此開發兼具高保護力和高安全性的乙型腦炎疫苗具有重要的意義。更為重要的是，目前尚沒有針對乙型腦炎病毒的治療技術，導致了該病的死亡率高，即使康復造成的后遺癥也高。

乙型腦炎病毒編碼兩個重要的免疫保護蛋白，分別為囊膜蛋白(E)和非結構蛋白1(NS1)。E蛋白為結構蛋白，免疫后可以誘生中和抗體，為機體提供保護作用。NS1蛋白為非結構蛋白，在體內也具有很高的抗原性，誘導產生的抗體在細胞中沒有中和活性，但是在動物體內卻具有比結構蛋白E更高的免疫保護效率。研究發現，針對E蛋白的中和抗體可在體內起到治療作用，然而針對乙型腦炎病毒NS1蛋白開發的治療技術尚未有報道。通過篩選針對NS1蛋白的保護性單克隆抗體，應用于乙型腦炎的治療，則具有較高的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，其目的之一是提供一種能夠對乙型腦炎病毒有特異性的單克隆抗體。

本發明的目的之二是提供一種能夠對乙型腦炎病毒起到保護作用的氨基酸序列。

本發明通過篩選得到了一株在動物體內對乙型腦炎病毒具有免疫保護功能的單克隆抗體，并對抗原位點進行了鑒定，得到一個具有較好免疫保護活性的抗原位點，具有較高的應用前景。

本發明通過如下技術方案實現：

申請人通過制備得到一株分泌乙型腦炎病毒NS1蛋白具有保護性作用單克隆抗體的JEV NS1單克隆抗體雜交瘤細胞株2B8，于2016年5月16日送交中國.武漢.武漢大學中國典型培養物保藏中心保藏，其保藏編號為CCTCC NO：C201699。

將所述的單克隆抗體的通過靜脈注射小白鼠后，可起到很好的治療效果。

所述的單克隆抗體能識別NS1蛋白中的²²⁵WPETHTLWGD²³⁴氨基酸片段，該片段的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。