[發(fā)明專利]安卡拉病毒毒株FAdV?HB及其滅活疫苗的制備和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710010883.8
• 申請(qǐng)日: 2017-01-06
• 公開（公告）號(hào): CN106636013A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金梅林;馬季;楊影;張丹;康超;李淑云;鄒忠;林顯;孫小美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;A61K39/235;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司42104
• 代理人: 樊戎,馮超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物疫苗制備技術(shù)領(lǐng)域，具體地指一種安卡拉病毒毒株FAdV-HB及其滅活疫苗的制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

禽腺病毒(Fowl adenovirus)根據(jù)不同的群特異性抗原分為三個(gè)群:I群，II群和III群。I群禽腺病毒包括傳統(tǒng)的禽腺病毒(Fowl adenovirus，F(xiàn)AV)及其它禽類分離物，共12個(gè)血清型，代表株為雞胚致死孤兒病毒(chicken embryo lethal orphan,CELO)。Ⅱ群禽腺病毒包括火雞出血性腸炎病毒(HEV)、雉雞大理石脾病毒和雞大脾病毒，它們與I群禽腺病毒無抗原相關(guān)性(Domermuth et al.,1980)。Ⅲ群禽腺病毒是與減蛋綜合征(egg drop syndrome,EDS)有關(guān)的一類病毒，可從雞、雞、鵝體內(nèi)分離得到，致病性差異很大(Russell W C.,1995)，它們只是部分含有I群禽腺病毒的共同抗原(McFerran et al.,1978)。

I群禽腺病毒呈現(xiàn)世界性分布，可感染多種禽類，在鴨鵝體內(nèi)多呈隱性感染，但是對(duì)雞的致病力較強(qiáng)。其所有12個(gè)血清型均能引起包涵體肝炎(IBH),只有血清4型禽腺病毒是心包積水肝炎綜合征(HHS)的主要病原。很多研究表明，腺病毒相關(guān)病毒(adeno-associated viruses,AAV)傳染性法氏囊病毒和雞傳染性貧血病毒可有效增強(qiáng)I群禽腺病毒的致病性(Fadly et al.,1976)。

心包積水-肝炎綜合征是由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的一種新型家禽疾病，其典型癥狀是導(dǎo)致3～5周齡肉雞突然死亡，并伴有嚴(yán)重的心包積水和肝炎，因此而得名。又因本病1987年首次于報(bào)道于巴基斯坦安卡拉地區(qū)，故該病又被稱為安卡拉病。隨后本病逐漸蔓延至世界各地，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。FAdV-4具有明顯的致病年齡段，對(duì)3-5周齡的致病力最強(qiáng)，即可通過水平傳播也可通過垂直傳播。其主要病變?yōu)樾陌环e有清亮或淡黃色的水樣或果凍狀液體，肝臟有局灶性壞死出血。病理組織切片觀察肝臟，肝細(xì)胞出現(xiàn)大量的嗜堿性核內(nèi)包涵體。

本病主要發(fā)生于3～5周齡的肉雞、817麻雞，偶見于20周齡肉種雞和蛋雞，其中以3～7周齡的雞易發(fā)病。發(fā)病雞群多于感染后3周齡開始死亡，4～5周齡達(dá)高峰，高峰持續(xù)期4～8d，5～6周齡死亡減少。病程8～15d，死亡率高達(dá)80％。發(fā)病雞無明顯先兆而突然倒地，沉郁，羽毛成束，出現(xiàn)呼吸道癥狀，兩腿劃空。雞感染后可成為終身帶毒者，并可間歇性排毒。

自2014年江蘇省第一次報(bào)到禽腺病毒的爆發(fā)，本病已在全國多地集中爆發(fā)，尤其是河南湖北和山東等地，對(duì)養(yǎng)禽產(chǎn)業(yè)造成巨大損失。通過對(duì)我國流行的Ⅰ群禽腺病毒進(jìn)行血清型和基因型分析，發(fā)現(xiàn)我國主要流行A、B、C三種基因型，共6個(gè)血清型(火雞1型、1型、4型、5型、8a/b型)。調(diào)查發(fā)現(xiàn)近期在豫南、皖北、蘇北、魯西北和膠東地區(qū)流行的禽腺病毒主要是血清4型和8a/b型，對(duì)雞群的致死率較高，發(fā)病急，蔓延迅速，對(duì)我國的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的威脅。因此，研制安全有效的I群禽腺病毒滅活疫苗，為提高國內(nèi)I群禽腺病毒疫苗的防控能力和防止I群禽腺病毒蔓延具有重要的使用意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種安卡拉病毒毒株FAdV-HB及其滅活疫苗的制備和應(yīng)用。該安卡拉病毒毒株FAdV-HB具有免疫原性好、增殖滴度高

該制備方法將FAdV-HB毒株接種在雞肝癌細(xì)胞(LMH)上，使病毒能在雞肝癌細(xì)胞(LMH)上增殖，制備出能產(chǎn)生較高抗體的安卡拉病毒滅活疫苗。疫苗的生產(chǎn)工藝、安全性、保護(hù)效果、免疫程序和有效期實(shí)驗(yàn)研究表明該疫苗是安全有效的。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一株安卡拉病毒毒株FAdV-HB，從湖北應(yīng)城發(fā)病雞場(chǎng)的肝臟組織樣品中分離得到，經(jīng)PCR擴(kuò)增，連接T載體進(jìn)行測(cè)序檢測(cè)鑒定該病毒為安卡拉病毒。該毒株FAdV-HB命名為：I群禽腺病毒株FAdv-HB，該毒株于2017年1月3日送交中國.武漢.武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NO：V201703。

上述毒株FAdV-HB的形態(tài)特征：