[發明專利]制備植物來源的蛋白質的方法

在審

• 申請號: 201710005957.9
• 申請日: 2010-09-21
• 公開（公告）號: CN107090021A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 路易斯-菲利普·韋齊納;馬農·科圖雷;達尼·帕克特;米凱萊·達吉斯;馬克-安德烈·德奧斯特
• 申請（專利權）人: 麥迪卡格公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/14;C07K1/34;C12N15/82
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 彭鯤鵬,鄭斌

1.制備植物來源的蛋白質或蛋白超結構的方法，其包括：

a.獲取包含定位于質外體之蛋白質或超結構蛋白的植物或植物物質，其中所述植物物質由整個植物、植物葉、葉片、粉碎的葉、莖、果實、根、或其組合組成；

b.通過用由纖維素酶組成的細胞壁降解多組分酶混合物，或用包含一種或多于一種纖維素酶和果膠酶的細胞壁降解多組分酶混合物處理所述植物或植物物質來產生原生質體/原生質球級分和質外體級分，其中纖維素酶與果膠酶的比例為1∶1至1∶0.25；和，

c.回收所述質外體級分，所述質外體級分包含所述植物來源的蛋白質或超結構蛋白，其中所述蛋白超結構具有約75至約1500kDa的分子量。

2.權利要求1的方法，其中所述纖維素酶與果膠酶的比例為1∶1、1∶0.75、1∶0.5或1∶0.25。

3.權利要求1的方法，其中所述細胞壁降解多組分酶混合物還包含緩沖劑或緩沖體系、滲壓劑或兩者的組合，所述緩沖劑或緩沖體系將pH維持在pH5至pH7.8的范圍內。

4.權利要求1的方法，其中所述一種或多于一種果膠酶的濃度為0.01％v/v至2.5％v/v。

5.權利要求1的方法，其中所述一種或多于一種纖維素酶的濃度為0.1％至5％w/v。

6.權利要求1的方法，其中所述細胞壁降解多組分酶混合物不包含脂肪酶或蛋白酶的一種或更多種。

7.權利要求1的方法，其中在所述獲取步驟(步驟a)中，用編碼選自以下組的蛋白質或超結構蛋白的核酸序列轉化所述植物：肽、蛋白質、蛋白花環、蛋白復合物、蛋白酶體、代謝區室、轉錄復合物、重組復合物、光合復合物、膜轉運復合物、核孔復合物、蛋白納米顆粒、糖蛋白、抗體、多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈單克隆抗體、病毒包膜蛋白、病毒結構蛋白、病毒衣殼蛋白和病毒外殼蛋白、嵌合蛋白、嵌合蛋白復合物、嵌合蛋白納米顆粒、嵌合糖蛋白、嵌合抗體、嵌合單克隆抗體、嵌合單鏈單克隆抗體、嵌合血凝素，以及收集所述植物或植物物質。

8.權利要求7的方法，其中所述核酸以瞬時方式引入所述植物中。

9.權利要求7的方法，其中所述核酸穩定整合進所述植物的基因組。

10.權利要求1的方法，其中在所述獲取步驟(步驟a)中，培養所述植物并收集所述植物或植物物質。

11.權利要求7的方法，其中所述核酸編碼單克隆抗體或流感血凝素。

12.權利要求1的方法，其中所述植物物質是葉、葉片或粉碎的葉。

13.權利要求1的方法，其還包括步驟d)從所述質外體級分中純化所述植物來源的蛋白質或超結構蛋白。

14.權利要求13的方法，其中所述純化步驟包括利用深層過濾來過濾所述質外體級分以產生澄清的提取物，然后用體積排阻層析、陽離子交換樹脂或親和層析、或者其組合來層析所述澄清的提取物。

15.制備植物來源的蛋白質或蛋白超結構的方法，其包括：

a.獲取包含植物來源的蛋白質或超結構蛋白的植物或植物物質，其中所述植物物質由整個植物、植物葉、葉片、粉碎的葉、莖、果實、根、或其組合組成；

b.用由纖維素酶組成的細胞壁降解多組分酶混合物，或用包含一種或多于一種纖維素酶和果膠酶的細胞壁降解多組分酶混合物消化所述植物或植物物質以產生消化級分，其中纖維素酶與果膠酶的比例為1∶1至1∶0.25；

c.過濾所述消化級分以產生過濾級分，從所述過濾級分中回收所述植物來源的蛋白質或超結構蛋白，其中所述蛋白超結構具有約75至約1500kDa的分子量。

16.權利要求15的方法，其中所述纖維素酶與果膠酶的比例為1∶1、1∶0.75、1∶0.5或1∶0.25。

17.權利要求15的方法，其中在所述獲取步驟(步驟a)中，培養所述植物并收集所述植物或植物物質。

18.權利要求15的方法，其中所述細胞壁降解多組分酶混合物還包含緩沖劑或緩沖體系、滲壓劑或兩者的組合，所述緩沖劑或緩沖體系將pH維持在pH5至pH7.8的范圍內。