[發(fā)明專利]一種靶向MLL白血病的雙特異性嵌合抗原受體基因及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710005395.8
• 申請(qǐng)日: 2017-01-04
• 公開（公告）號(hào): CN106749677B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉晗;李丹;孫燕;朱守海;葛茂林;康婷;胡雨田
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/02
• 代理公司: 上海卓陽(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發(fā)明涉及一種靶向MLL白血病的雙特異性嵌合抗原受體基因及其應(yīng)用，本發(fā)明的雙特異性嵌合抗原受體可特異性識(shí)別MLL白血病細(xì)胞表面CD19和CD133兩種腫瘤相關(guān)抗原。將TanCAR分子重組到病毒載體上并轉(zhuǎn)染T淋巴細(xì)胞系，表達(dá)雙特異性嵌合抗原受體，可特異性識(shí)別殺傷CD19CD133雙陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞，減輕對(duì)非腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，降低了腫瘤抗原逃逸的幾率。并且TanCAR(1linker)?Jurkat在較低效靶比即可特異性殺傷MLL白血病細(xì)胞，在之后的臨床使用中會(huì)較少出現(xiàn)毒副作用，例如細(xì)胞因子風(fēng)暴，神經(jīng)毒性等。本發(fā)明的雙特異性嵌合抗原受體可應(yīng)用在MLL白血病治療中，清除患者體內(nèi)腫瘤，延長(zhǎng)患者生存期。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種靶向MLL白血病的雙特異性嵌合抗原受體基因。

背景技術(shù)

腫瘤特異性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)是機(jī)體清除腫瘤細(xì)胞的主要手段，在正常的免疫反應(yīng)中，T細(xì)胞活化需要兩個(gè)刺激信號(hào)。其中，T細(xì)胞表面TCR-CD3復(fù)合體與抗原肽-MHC分子結(jié)合，提供T細(xì)胞活化的第一信號(hào)，決定T細(xì)胞的殺傷特異性；第二信號(hào)是由T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞(APC)或其它細(xì)胞表面的共刺激分子介導(dǎo)產(chǎn)生。腫瘤細(xì)胞通過下調(diào)參與T細(xì)胞識(shí)別及抗原反應(yīng)的分子表達(dá)，降低免疫原性等途徑產(chǎn)生免疫逃逸，從而使機(jī)體的免疫系統(tǒng)不能很好的清除腫瘤。

研究發(fā)現(xiàn)，以腫瘤特異性單克隆抗體的單鏈可變區(qū)(scFv)取代TCR的可變區(qū)，并將scFv直接和共刺激分子(如CD28,4-1BB等)以及T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)域CD3-zata連接，形成嵌合抗原受體(CAR)表達(dá)于T細(xì)胞表面，通過scFv識(shí)別腫瘤特異性抗原，通過非MHC限制性途徑與抗原反應(yīng)，提供T細(xì)胞活化等第一、第二信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞活化，增殖，特異性殺死腫瘤細(xì)胞。自1993年，由Eshhar和他的同事們首次提出CAR的概念以來，CAR-T已經(jīng)發(fā)展到第三代。第一代CAR包含胞外特異性識(shí)別腫瘤抗原的scFv片段，胞內(nèi)激活信號(hào)由CD3-zata或Fc段的ITAM(immonoreceptor tyrosine-based activation motifs)信號(hào)鏈來傳遞，但是第一代CAR缺乏T細(xì)胞的共刺激信號(hào)，導(dǎo)致T細(xì)胞只能瞬時(shí)發(fā)揮效應(yīng)。第二代CAR在第一代CAR的基礎(chǔ)上增加了一個(gè)共刺激信號(hào)分子的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，提供T細(xì)胞活化的兩種信號(hào)，如CD28,CD134/OX40,CD137/4-1BB等，增強(qiáng)了T細(xì)胞的增殖及細(xì)胞因子分泌的能力。第三代CAR分子在第二代的基礎(chǔ)上又增加了另外一種共刺激信號(hào)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，如在共刺激結(jié)構(gòu)CCD28之后仔融合一個(gè)共刺激分子如4-1BB，產(chǎn)生一個(gè)三重信號(hào)的CAR受體，第三代CAR受體改造的T細(xì)胞具有更好的效應(yīng)功能和體內(nèi)存活時(shí)間。

近年來，應(yīng)用靶向CD19的嵌合抗原受體重組T細(xì)胞治療B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)獲得了重大進(jìn)展，在臨床上取得了顛覆性治療效果。但由于CD19是B細(xì)胞的表面標(biāo)志，在正常B細(xì)胞以及B細(xì)胞腫瘤中均有表達(dá)，該治療策略會(huì)帶來不可避免的副作用就是使正常B細(xì)胞減少，因此患者雖然在CD19CAR-T治療過后會(huì)有很大程度的緩解或者完全治愈，但是需要長(zhǎng)期甚至終身通過靜脈補(bǔ)充丙種球蛋白來避免由于B細(xì)胞減少而導(dǎo)致的免疫力下降，極大的降低了患者的生存質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

MLL白血病是一類常見的惡性急性白血病，即可以表現(xiàn)為B-ALL，也可以表現(xiàn)為AML，約占全部急性白血病的10％。尤其是嬰兒白血病以及拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑治療引起的繼發(fā)性白血病中更是占到了70％以上。MLL極為兇險(xiǎn)，預(yù)后極差，被認(rèn)為是最難治的一類白血病，亟需尋找有效的治療方法。