[發明專利]一種酪蛋白來源的降膽固醇肽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710003864.2
• 申請日: 2017-01-04
• 公開（公告）號: CN106632649B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 郭宇星;潘道東;高彬;熊彬屹;姜瀟瀟
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K5/103;C12P21/06;A23L33/18
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 余俊杰

1.一種酪蛋白來源的降膽固醇肽，其特征在于，所述降膽固醇肽為下述的氨基酸序列：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。

2.權利要求1所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

（1）制備酪蛋白酶解液：配制40～60mg/mL的酪蛋白溶液，加入蛋白酶，蛋白酶的終濃度為50～70mg/mL，酶解pH為6.0～8.0，酶解溫度為45～50℃，酶解時間為3～4h，加熱滅活，離心取上清；

（2）制備酪蛋白肽超濾液：將步驟（1）收集的上清液進行超濾，超濾膜壓力為0.1～0.4MPa，流速為5～10mL/min；

（3）制備降膽固醇粗肽：采用凝膠色譜分離純化步驟（2）制備獲得的酪蛋白肽超濾液，220nm檢測出峰位置，收集各吸收峰，以膽固醇膠束溶解度抑制率為評價指標測定降膽固醇活性，具有降膽固醇活性的組分進行冷凍干燥；

（4）降膽固醇肽序列分析：采用超高效液相-質譜聯用分析降膽固醇粗肽的氨基酸序列；

（5）降膽固醇肽合成：根據步驟（4）的氨基酸序列分析結果合成降膽固醇肽，收集具有降膽固醇活性的多肽。

3.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述酪蛋白溶液濃度為50mg/mL ，蛋白酶的終濃度為60mg/mL ，酶解pH為7.0，酶解溫度為47.5℃，酶解時間為3.5h。

4.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述蛋白酶為中性蛋白酶。

5.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，步驟（2） 中所述超濾膜壓力為0.25MPa，流速為7.5mL/min。

6.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所述凝膠色譜采用的過濾介質為Sephadex G-10凝膠，蒸餾水平衡，上樣量為1～2%凝膠色譜柱體積，洗脫速度為2.5～3.5mL/min。

7.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法，其特征在于，步驟（4）所述超高效液相-質譜聯用分析中液相色譜分析柱采用的是ACQUITY UPLC BEH130 C18柱，規格為2.1×150nm，1.7μm，質譜儀采用的是WATERS MALDI SYNAPT Q-TOF MS。

8.權利要求1所述的酪蛋白來源的降膽固醇肽在功能食品中的應用。