[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)胞苷的重組微生物及生產(chǎn)胞苷的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710003833.7
• 申請(qǐng)日: 2017-01-04
• 公開（公告）號(hào): CN106754602B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉愛霞;胡志浩;范俊英;江君君;田鋒;王欣彤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州華賽生物工程技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P19/38;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/15;C12R1/225
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 尉月麗

1.一種使用重組微生物生產(chǎn)胞苷的方法，其特征在于：包括步驟為：

（1）在重組微生物內(nèi)去除利用和降解胞苷的酶的編碼基因使胞苷不再參與細(xì)胞中的代謝，所述的利用和降解胞苷的酶為胞苷/尿苷激酶Udk、胞苷脫氨酶Cdd、核糖核苷水解酶RihA和RihC、和核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC；

（2）從CMP的去磷酸化來合成胞苷，在重組微生物內(nèi)表達(dá)或超量表達(dá)對(duì)CMP有特異性的核苷酶，所述的核苷酶為釀酒酵母來源的PHM8；

（3）增強(qiáng)細(xì)胞中CMP的供給，在重組微生物內(nèi)去除CMP激酶Cmk，表達(dá)或超量表達(dá)CTP和CDP磷酸化酶或相應(yīng)的核苷酸酶，所述的CTP和CDP磷酸化酶或相應(yīng)的核苷酸酶為大腸桿菌來源的NudG；

（4）對(duì)重組微生物的嘧啶合成途徑的阻遏蛋白編碼基因進(jìn)行敲除和/或解除嘧啶合成途徑終產(chǎn)物的反饋抑制，通過以下方法：

1）敲除氨甲酰磷酸合成酶的編碼基因的轉(zhuǎn)錄抑制阻遏蛋白的編碼基因，所述氨甲酰磷酸合成酶的編碼基因的轉(zhuǎn)錄抑制阻遏蛋白的編碼基因?yàn)镻urR；

（5）過表達(dá)乳清酸核糖磷酸轉(zhuǎn)移酶，所述的乳清酸核糖磷酸轉(zhuǎn)移酶為大腸桿菌來源的PyrE；

（6）過表達(dá)大腸桿菌來源的尿苷-5'-單磷酸激酶PyrH的突變體D93A或?qū)MP有特異性的磷酸化酶，所述的磷酸化酶為大腸桿菌來源的酸性磷酸化酶AphA；

所述的重組微生物為大腸桿菌。