[發明專利]一種從棉子糖乳球菌次級代謝物中分離活性化合物的方法

在審

• 申請號: 201710001970.7
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN106636233A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 石佳明
• 申請（專利權）人: 石佳明
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;A61K31/222;A61P3/06;A61K8/37;A61Q19/02;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種從棉子糖乳球菌次級代謝物中分離活性化合物的方法，屬于生物領域。

背景技術

天然產物是藥物先導化合物發現的重要來源，近年來，越來越多的天然產物化學家把目光投向生物種類更加多樣的微生物。

本發明從一株棉子糖乳球菌次級代謝物中分離出一種活性化合物，并通過優化培養條件，可以高效生產該化合物，成本低。經鑒定，該活性化合物具有顯著的降血脂作用，還具有美白作用。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出從一株棉子糖乳球菌次級代謝物中分離出一種活性化合物，并通過優化培養條件，可以高效生產該化合物，成本低。經鑒定，該活性化合物具有顯著的降血脂作用，還具有美白作用。

本發明人從廣東微生物保藏中心購得一株棉子糖乳球菌，其編號為：GIM1.1015，根據保藏中心的記載，該菌株的其他編號為：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC 1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

對該株棉子糖乳球菌進行培養，在MRS液體培養基中培養24-72h，共發酵100L。過濾、濃縮后得到水相10L，用乙酸乙酯進行萃取，減壓濃縮后得到乙酸乙酯層浸膏20g，經300目硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(3:1-1:2)梯度洗脫，合并相同組分，各組分再經反復硅膠層析，Sephadex LH-20和RP-18反相柱色譜分離純化以及C₁₈高效液相制備得兩種化合物，1(3.5mg)、化合物2(8.1mg)

經鑒定，化合物1的結構式為：

本發明人還驚訝地發現，該活性化合物具有顯著的降血脂作用，還具有美白作用。

本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發明的實踐了解到。

本發明的有益之處在于：

本發明從一株棉子糖乳球菌次級代謝物中分離出一種活性化合物，并通過優化培養條件，可以高效生產該化合物，成本低。經鑒定，該活性化合物具有顯著的降血脂作用，還具有美白作用。

附圖說明

圖1為黑色素代謝原理圖。

具體實施方式

下面詳細描述本發明的實施例，所述實施例僅用于解釋本發明，而不能理解為對本發明的限制。

實施例1：

本發明人從廣東微生物保藏中心購得一株棉子糖乳球菌，其編號為：GIM1.1015，根據保藏中心的記載，該菌株的其他編號為：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC 1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

對該株棉子糖乳球菌進行培養，在MRS液體培養基中培養24-72h，共發酵100L。過濾、濃縮后得到水相10L，用乙酸乙酯進行萃取，減壓濃縮后得到乙酸乙酯層浸膏20g，經300目硅膠柱層析，二氯甲烷-甲醇(3:1-1:2)梯度洗脫，合并相同組分，各組分再經反復硅膠層析，Sephadex LH-20和RP-18反相柱色譜分離純化以及C18高效液相制備得兩種化合物，化合物1(3.5mg)、化合物2(8.1mg)

經鑒定，化合物1為淡黃色粉末，溶于二氯甲烷，分子式為C₁₃H₁₄O₃；mp.60攝氏度，化合物1的結構式為：

其核譜數據如下所示：

經檢索核實，和已知文獻報告過的化合物一致(天然產物研究與開發Nat ProdRes Dev 2014，26:159-161)，但是該文獻沒有對該化合物的功能進行研究。

實施例2：

本發明人對實施例1的發酵方法進行改進，發現可以大幅提高該化合物的產量，為低成本工業化生產提供了可能性。

本發明基于如下發現：特定濃度范圍的甘草查爾酮B配合特定的溫度曲線，可以令人驚訝地大幅提高該化合物的產量。甘草查爾酮B購自上海麗臣公司，純度＞98％。

從廣東微生物保藏中心購得一株棉子糖乳球菌，其編號為：GIM 1.1015，根據保藏中心的記載，該菌株的其他編號為：JCM 5706。＝ATCC 43920＝CGMCC1.1935＝DSM 20443＝NBRC 100932。

對該株棉子糖乳球菌進行培養，接種進modified-MRS液體培養基中培養48h：前18h保持35攝氏度；第19-22h保持18攝氏度，第23-48h保持30攝氏度培養；