[發明專利]一種結直腸癌早期肝轉移動物模型及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201710001486.4
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN106580512A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 姜慧杰;閆林林;姜昊;徐海龍;李鑫
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;A61D1/00;A61B8/00;A61B6/03;A61B5/055;C12Q1/02;A61K35/13;G01N1/30;G01N21/25;A01K67/027
• 代理公司: 成都環泰知識產權代理事務所(特殊普通合伙)51242
• 代理人: 鄧瑞,李斌

1.一種結直腸癌早期肝轉移動物模型，其特征在于，所述結直腸癌早期肝轉移動物模型細胞懸液濃度為2.5×10⁷/ml，經脾注入結腸癌細胞0.1ml不等，注射時間3分鐘；同時采用Vetbond 3M組織粘合劑封閉切口，將脾臟放回原位。

2.一種如權利要求1所述結直腸癌早期肝轉移動物模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟：

步驟一，分別選取人結直腸癌細胞株，確定細胞懸液濃度為2.5×10⁷/ml，經脾緩慢注入結腸癌細胞0.1ml不等，注射時間3分鐘；

步驟二，同時采用Vetbond 3M組織粘合劑封閉切口，將脾臟放回原位。

3.一種利用權利要求1所述結直腸癌早期肝轉移動物模型的結直腸癌株多種核素攝取方法，其特征在于，所述結直腸癌株多種核素攝取方法包括：

選取高低不同轉移能力的Lovo，HT29，SW620，SW480，L02結直腸癌細胞，進行多種核素攝取實驗¹⁸F-FDG,¹⁸F-FLT,¹⁸F-FMISO；

細胞攝取率公式：％ID/10⁵＝(樣本計數-本底計數)/總計數×100％/細胞計數；其中本底計數是指沒有鋪細胞的空孔非特異吸附計數，總計數是指每孔中加入的總的放射性計數。

4.如權利要求3所述的結直腸癌株多種核素攝取方法，其特征在于，所述結直腸癌株多種核素攝取方法中Lovo細胞對¹⁸F-FDG的攝取明顯低于HT-29細胞，且不受總劑量的影響；而HT-29細胞隨著¹⁸F-FDG劑量的增加而攝取增加，攝取率則下降，證實不同轉移潛能癌細胞的體外核素攝取率存在差異。

5.一種利用權利要求1所述結直腸癌早期肝轉移動物模型的結直腸癌株及肝轉移瘤生物學特性對比分析方法，其特征在于，所述結直腸癌株及肝轉移瘤生物學特性對比分析方法采用SABC法對生物學特性指標VEGF、CD82、HIF-1α、nm23染色分析；顯微鏡下觀察并采集圖像，分析陽性表達差異，按染色強度及陽性細胞數來計算評分；測定高、低轉移潛能結直腸癌細胞的分子生物學指標的變化規律；10％甲醛固定早期肝轉移結節及脾原位腫瘤結節，石蠟切片，HE染色觀察肝轉移瘤形態，免疫組化染色測定檢測生物學特性指標VEGF、HIF-1α表達量的差異。

6.一種利用權利要求1所述結直腸癌早期肝轉移動物模型的結直腸癌早期肝轉移進行多種單一模態的影像檢測方法，其特征在于，所述結直腸癌早期肝轉移進行多種單一模態的影像檢測方法包括：

(1)對結直腸癌肝轉移的動物模型進行超聲探查所用探頭為L15-7io淺表探頭，對肝臟異常回聲記錄，并測量大小后采集圖像；

(2)對構建的結直腸癌肝轉移裸鼠模型進行Micro CT增強掃描，Micro CT采用的造影劑為Fenestra LC，造影劑用量為0.4ml/20g，每次掃描采取的增強方式：注入造影劑后3小時進行掃描；

(3)對構建的結直腸癌肝轉移裸鼠模型行磁共振肝臟橫斷位及冠狀位掃查，掃描序列：T2WI橫斷面及冠狀位。

7.一種利用權利要求1所述結直腸癌早期肝轉移動物模型的早期肝轉移瘤發生生物學特性檢測方法，其特征在于，所述早期肝轉移瘤發生生物學特性檢測方法包括：

對構建的結直腸癌肝轉移裸鼠模型進行Micro PET成像；麻醉好的裸鼠模型通過尾靜脈注射100μci的放射性分子探針0.2ml，俯臥位頭先進的體位固定于掃描床上，于注射藥物的一小時后行掃描¹⁸F-FDG，20分鐘后¹⁸F-FB-NGA；均靜態掃描10分鐘；

掃描結束后，將掃描的圖像用OSEM 3D迭代重建，迭代2次，重建后利用醫學分析軟件PMOD勾畫感興趣區域，并得到相應感興趣區域上放射性物質攝取的平均值。