[發明專利]基于非天然糖代謝工程的腫瘤特異性T細胞及其構建方法

有效

• 申請號: 201710000893.3
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN108265027B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 周德敏;王偉玲
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京驥馳知識產權代理有限公司 11422
• 代理人: 唐曉峰

本發明公開了一種表面修飾有唾液酸衍生物的T細胞。其中，所述唾液酸衍生物含有疊氮基團，進一步所述唾液酸衍生物為Ac₄ManNAz。具體地，本發明公開了Ac₄ManNAz?DIBO?c(RGDfK)或Ac₄ManNAz?DIBO?Folate修飾的T細胞，還公開了制備該T細胞的方法，以及本發明的修飾后T細胞在制備治療和/預防腫瘤細胞的藥物中的用途。

技術領域

本發明屬于免疫學和細胞生物學領域，涉及一種構建特異性靶向腫瘤并殺傷腫瘤的T細胞及其構建方法和用途。

背景技術

目前有多種方法用來治療和預防腫瘤，但是腫瘤依然是世界范圍內的一個重要死因。傳統的針對分裂期細胞的放化療的方法也會影響正常細胞，對腫瘤患者產生了不可忽略的副作用。免疫治療是一種可以利用特異性免疫系統對腫瘤進行靶向殺傷同時也不影響正常細胞的治療方法。過繼性細胞回輸的被動免疫治療策略是將體外刺激培養的淋巴細胞過繼回輸到腫瘤病人治療腫瘤的方法。過繼回輸的淋巴細胞能直接殺傷腫瘤，不需要體內免疫系統的激活，從而能克服疫苗治療中需要體內激活免疫系統發揮作用這一重要限制。目前主要包括兩種獲得腫瘤特異性細胞的方法：一種是存在于患者腫瘤組織內的浸潤性淋巴細胞的體外培養、擴增及腫瘤特異性的篩選；另一種是修飾外周血細胞使其獲得腫瘤特異性并在體外迅速擴增。由于獲得腫瘤特異性T細胞相對困難，因此可以通過基因修飾的方法獲得腫瘤特異性T細胞，使其能特異性殺傷腫瘤。其中，利用基因工程修飾T細胞使其表達嵌合性抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)，用來特異性識別腫瘤相關性抗原的方法，是一種有前景的腫瘤免疫治療策略。

CAR主要由胞膜外抗原結合區、鉸鏈區和胞內信號傳導區三部分構成。膜外區是一段單鏈可變區結構域(single chain Fv domain,scFv)，具有特異性識別并結合腫瘤相關抗原(tumor associated antigen,TAA)的功能。鉸鏈區通常是由免疫球蛋白超家族組成，胞內信號傳導區主要是由CD3復合體中的ζ鏈組成。近年來的深入研究發現在胞內區的信號傳導區加入共刺激分子如CD28或和CD137可以加強細胞的抗腫瘤免疫反應活性，因此出現了二代及三代的CAR。表達CAR的細胞可以直接識別并結合腫瘤細胞表面的TAA，將信號傳入細胞內，激活細胞分泌細胞因子包括穿孔素、顆粒酶、IFN-γ、TNF-α等，從而發揮殺傷腫瘤細胞作用。因此CAR-T將抗體-抗原特異性結合能力及T細胞殺傷功能集于一身。除此之外，CAR還有其他優勢，比如CAR識別的抗原不需要APC進行加工和提呈；CAR不僅可以識別短的抗原肽，還可以識別碳水化合物和糖脂類非蛋白抗原；高親和力的scFv可以使得T細胞對低濃度的抗原依然敏感，臨床應用案例已取得令人振奮的結果。

目前，許多關于CAR-T細胞治療腫瘤的早期臨床試驗正在進行，也有一些已經完成了過繼性回輸CAR-T細胞安全性和可行性的評估。例如，CD19 CAR-T細胞治療淋巴瘤和白血病、GD2 CAR-T細胞治療神經膠質瘤、PSMA CAR-T細胞治療前列腺癌、HER2/neu CAR-T細胞治療肺癌等已經進入臨床試驗階段，并取得了良好成果。