[發(fā)明專利]一種免疫微球層析法檢測肝素結合蛋白檢測試紙

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710000257.0
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN108267592A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 范秋蘋;潘志紅;張寧;高巍巍;陳美艷;南洋;汪廷楓;郝存;田茹
• 申請（專利權）人: 普邁德（北京）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種免疫微球層析法檢測肝素結合蛋白檢測試紙，可以在臨床幫助診斷患者中肝素結合蛋白水平，包括使用即時免疫層析定量或定性測定患者中肝素結合蛋白的體液水平是否高于預定范圍，其特征在于，包括如下步驟：

S1、定標曲線制備，因肝素結合蛋白指標在不同體液評判不同感染的濃度水平，對肝素結合蛋白檢測范圍進行標定，其特征在于標定的標準溶液包含但不限于0.1ug/L、0.5ug/L、1ug/L、5ug/L、10ug/L、50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L；

S2、含有肝素結合蛋白抗體的檢測緩沖液的制備，其特征在于用包含但不限于緩沖液、蛋白保護劑、糖類、表面活性劑、防腐劑的一種或幾種組合配制檢測緩沖液，抗體來源包括但不限于兔抗人、鼠抗人肝素結合蛋白抗體，抗體濃度包含但不限于1ng/ul-3ng/ul；

S3、微球標記的二抗的制備，其特征在于用包含但不限于緩沖液、血清白蛋白、糖類、表面活性劑、防腐劑的一種或幾種組合配制標記緩沖液，用羧基化或氨基化的熒光或彩色乳膠微球標記二抗，抗體濃度包含但不限于0.1ug/ul-3ug/ul；

S4、樣品墊包被固相，其特征在于應用但不限于玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、NC膜，用一種或幾種防腐劑、表面活性劑、血清白蛋白、氯化鈉、糖類試劑進行浸泡，將步驟S3中的標記二抗固相噴涂于樣品墊，置于37-56℃干燥處理，儲存于密封包裝袋中待用；

S5、包被鼠抗人肝素結合蛋白抗體檢測線制備，其特征在于抗體包被量包括但不限于0.1-1ug/cm，抗體包被緩沖液包含一種或幾種防腐劑、表面活性劑、血清白蛋白、氯化鈉、糖類試劑組合，置于37-56℃干燥處理；

S6、包被有羊抗兔抗體質控線制備、其特征在于配制羊抗兔抗體質控液，按照0.1-2ug/cm的量包被質控線；

S7、分離膜及試紙條的組裝、試紙條的組裝，其特征在于將S3中標記二抗的樣本墊組裝到帶有黏膠載體塑料板一端，用力按壓，將包被有質控線和檢測線的膜組裝于試紙條中部，試紙條的另一端粘貼吸水膜，維持樣品側向層析，將試紙條放入塑料盒中，將樣品墊的一段放置在塑料盒底部，吸水紙一端固定于塑料盒頂端；

S8、臨床樣本檢測，其特征在于根據肝素結合蛋白標準曲線，室溫下在試紙條的樣品墊部位依次加入檢測緩沖液和患者樣本，定量檢測肝素結合蛋白水平；

在步驟S1中所述的肝素結合蛋白標定曲線范圍，評判不同的感染指標，其特征在于嚴重敗血癥患者樣本中的HBP濃度優(yōu)選大于20ng/ml、對于細菌性腦膜炎患者樣本中的HBP濃度優(yōu)選大于50ng/ml、對于尿路感染的患者樣本中HBP濃度優(yōu)選大于50ng/ml。

在步驟S1中所述的患者樣本根據感染檢測需要包括但不限于血液和尿液，

在步驟S2中加入的緩沖液包括但不限于PBS、HEPES、Tris緩沖液；加入的糖類物質包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖類，糖類物質加入比例包括但不限于1％-10％；加入的血清白蛋白包括但不限于BSA、HSA、標準血清，比例包括但不限于1％-10％；。

2.根據權利要求1所述的一種免疫微球層析法檢測肝素結合蛋白檢測試紙制備方法，其特征在于，微球或顯色顆粒粒徑包括但不限于0.1-1微米。

3.根據權利要求2所述的微球或顯色顆粒，其特征在于微球或顯色顆粒包括但不限于熒光微球、彩色微球，優(yōu)選熒光微球。

4.根據權利要求1所述的樣品墊包被固相，其特征在于樣品墊包被有微球標記的二抗，該標記二抗可同時可結合檢測緩沖液中的肝素結合蛋白抗體和反應墊質控線包被抗體。

5.根據權利要求4所述的反應墊膜包括但不限于硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜。

6.根據權利要求1所述的一種免疫微球層析法檢測肝素結合蛋白檢測試紙，該試紙檢測結果需插入樂普公司的免疫定量分析儀，讀取待測樣品的熒光值或光密度值。