[發明專利]制備活的微生物樣品和微生物用于隨后的質譜測量和評估

有效

• 申請號: 201680091260.1
• 申請日: 2016-11-30
• 公開（公告）號: CN110023761B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 葉夫根尼·艾德萊維希;卡斯滕·貝克爾
• 申請（專利權）人: 布魯克·道爾頓有限及兩合公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 張凱;張杰

本發明涉及一種制備活的微生物樣品和微生物用于隨后的質譜測量和評估的方法。可以從這種測量得出的結果可以特別地用于根據物種/亞種更快地識別微生物樣品中的微生物和/或快速確定微生物對抗微生物物質的抗性/敏感性和/或微生物的進一步特征；例如，在致病性，毒力和代謝方面的特征。根據本發明的優選實施形式，制備特別直接在質譜樣品載體上進行。

技術領域

本發明涉及一種制備活的微生物樣品和微生物用于隨后的質譜測量和評估的方法。可以從這種測量得出的結果可以特別地用于根據物種/亞種更快地識別微生物樣品中的微生物和/或快速確定微生物對抗微生物物質的抗性/敏感性和/或微生物的進一步表征；例如，在致病性，毒力和代謝方面的特征。根據本發明的優選實施形式，制備特別直接在質譜樣品載體上進行。

背景技術

傳染病仍然是醫學中的主要問題之一。感染可以獨立發生，但特別是作為其他疾病的并發癥或免疫抑制治療和/或對患者使用異物的結果。近年來，現代醫學的進步以及復雜的外科手術和免疫抑制療法與此相關的增加以及異物的使用已經成為導致感染率增加的因素之一。在此例如提到實體器官和骨髓移植物的移植物。

尤其是多重耐藥病原體的增加引起擔憂；例如，細菌(包括MRSA-耐甲氧西林金黃色葡萄球菌；VRE-耐萬古霉素腸球菌；耐環丙沙星，美羅培南或妥布霉素的銅綠假單胞菌)或真菌(包括耐氟康唑或伏立康唑的白色念珠菌)。由這些病原體引起的感染特別難以用抗微生物物質治療。由于在所謂的“經驗性”或“計算”療法的框架內最初所施用的抗微生物藥物通常在其活性譜中不包括多重耐藥性病原體，因此對于治療的成功而言，在早期檢測出該耐藥性是至關重要的。快速鑒定耐藥性微生物可以實現及時轉換到對這些病原體有效的抗菌物質。為簡單起見，它們在下文中被稱為抗生素；該術語不僅指對細菌有效的物質，還指對抗真菌和其他微生物的藥物。這種在早期階段切換到正確的抗微生物治療對于治療的成功至關重要。

目前尤其缺乏可在僅幾個小時內提供靈敏度測試結果的表型(即基于培養的)測試系統或單個測試。表型抗性意味著盡管存在抗生素，微生物也會生長。對于表型抗生素敏感性，如果以足夠的濃度施用，則在測試的抗生素存在下抑制這種生長。表型靈敏度測試代表了黃金標準；一個原因是測試結果無關于所基于的抗性機制而產生。雖然可以利用分子生物學在短時間內檢測某些抗性基因；例如通過聚合酶鏈反應(PCR)。但這種檢測只能用于某些抗性機制；其他抗性機制無法得到檢測。此外，這種分子測試僅檢測已知的遺傳編碼的抗性機制。因此，除非檢測到特異性抗性基因，否則不可能對病原體對抗生素的敏感性做出可靠的說明。另外，如果檢測到抗性基因，利用這些方法不總是允許對表型抗性進行可靠的預測。這是因為基因表達的表現可以變化；盡管存在該基因，微生物仍可以在表型方面對抗生素反應敏感。

此外，基因檢測對于許多抗性機制來說是不可能的。能夠通過其表型快速檢測特異性抗性機制的方法例如包括，檢測由一些細菌產生的β-內酰胺酶。β-內酰胺酶是可以裂解β-內酰胺抗生素并因此使它們無效的細菌酶。檢測可以通過檢測β-內酰胺裂解來完成，例如通過pH指示劑的顏色變化或借助于MALDI-TOF?MS(基質輔助激光解吸/電離-MALDI；TOF-飛行時間；質譜-MS)。在MALDI-TOF?MS中，以質譜測定未裂解的β-內酰胺和/或其裂解產物。盡管這些方法在某些情況下可能是有利的，但它們的普遍缺點是僅檢測到一種特異性抗性機制，并且不可能對病原體的敏感性或抗性作出普遍的，明確的說明。

因此迫切需要這樣的方法，其一方面如通常的測試方法實現了基于生長的表型敏感性測試，以及由此產生的普遍性說明，但另一方面比通常的方法明顯更快。這種快速測試的一般目的是在幾小時內，即在1-4小時內提供結果。該時間目標的可實現性首先取決于試驗方法，其次取決于待測微生物的特性；例如，他們的生長速度。