[發明專利]制備嵌合抗原受體表達細胞的方法

在審

• 申請號: 201680082556.7
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN109153975A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: F·法金;L·曹;M·R·格林;T·戈洛溫納
• 申請（專利權）人: 諾華股份有限公司;賓夕法尼亞大學托管會
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C07K14/725
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 柴云峰;黃革生

1.一種制備可被工程化以表達嵌合抗原受體(CAR)的免疫效應細胞(例如T細胞)群的方法，所述方法包括：

a)提供包含免疫效應細胞的冷凍輸入樣品，

b)解凍冷凍輸入樣品以產生解凍的樣品，和

c)對解凍的樣品進行淘析并收集免疫效應細胞，從而產生包含適合表達CAR的免疫效應細胞的輸出樣品。

2.權利要求1所述的方法，其中所述冷凍輸入樣品是血漿單采血液成分術樣品。

3.權利要求1或2所述的方法，還包括以下的一項、兩項、三項或全部：

d)在流動條件下除去CD19+細胞；

e)使用包含碘克沙醇，例如在水中的60％碘克沙醇，例如Optiprep介質和/或具有大于Ficoll的密度(例如，大于1.077g/ml，例如約1.32g/ml)的介質進行密度離心；

f)用包含右旋糖和/或氯化鈉的緩沖液，例如D5介質(5％右旋糖和0.45％氯化鈉)進行洗滌步驟(例如，在解凍的樣品上)，例如，其中使用CS5(CellSaver5+)儀器進行洗滌步驟；和

g)在流動條件下進行CD3/CD28+細胞的陽性選擇。

4.權利要求1-3中任一項所述的方法，其包括調節解凍樣品的粘度的步驟，例如通過向解凍樣品中加入等滲溶液，例如PBS。

5.權利要求1-4中任一項所述的方法，其中：

使用約30-82mL/min或50-80mL/min的流速進行淘析，和/或對于每個級分收集體積為約250-1250mL或300-1000mL；例如使用約30、40、50、60、70、72或82mL/min，例如約70或72mL/min的流速進行淘析；

使用約250、400、500、900或975mL，例如約400或975mL的收集體積進行淘析；和/或

以約2400rpm進行淘析。

6.權利要求1-5中任一項所述的方法，其中所述輸入樣品包含：

至少10％、15％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、35％或40％的單核細胞；

少于60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％或20％的T細胞；和/或

至少1％、2％、5％、10％、15％、20％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的B細胞。

7.權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述輸出樣品包含：

少于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、2％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的單核細胞；

至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的T細胞；

少于20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、2％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的B細胞；

至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.7％或99.9％的CD4+CD25+細胞；和/或

至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.7％或99.9％的CD8+CD25+細胞。

8.權利要求1-7中任一項的方法，其具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％T細胞的T細胞回收產率。

9.權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述輸出樣品與編碼CAR的核酸接觸。