[發明專利]CALB變體

在審

• 申請號: 201680081231.7
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN108603182A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: S.K.克倫登寧;Y.G.瑩靈;金浩信
• 申請（專利權）人: 伊士曼化工公司;北卡羅萊納州立大學
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12P21/02;G06F19/16
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 韋欣華;楊戩

1.一種南極假絲酵母脂肪酶B（CALB）變體，與野生型（WT）CALB相比，其具有約2倍至約15倍的改善的合成活性。

2.權利要求1的CALB變體，其中所述CALB變體具有在SEQ ID NO: 2的位置141、146、188、189、223、227或235處具有一個或多個修飾的氨基酸序列。

3.權利要求2的CALB變體，其中所述氨基酸序列具有至少兩個修飾。

4.權利要求3的CALB變體，其中所述修飾是氨基酸取代。

5.權利要求4的CALB變體，其中所述氨基酸取代是A141T、A146T、E188D、I189V、D223G、S227T或V235A。

6.權利要求5的CALB變體，其中所述CALB變體具有SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 22的氨基酸序列。

7.一種核酸，其編碼權利要求1的CALB變體。

8.一種載體，其包含權利要求7的核酸。

9.一種表達載體，其包含權利要求7的核酸。

10.權利要求9的表達載體，其中所述表達載體包含分泌信號。

11.一種用于表達CALB變體的方法，其中所述方法包括將權利要求9的載體轉染到宿主細胞內，并且在允許所述CALB變體表達的條件下培養所述宿主細胞。

12.一種用于制備CALB變體的方法，其中所述方法包括將權利要求10的載體轉染到宿主細胞內，在培養基中和在允許所述CALB變體表達的條件下培養所述宿主細胞，并且從所述培養基中獲得上清液。

13.權利要求12的方法，其中所述方法進一步包括濃縮所述包含CALB變體的所述上清液。

14.權利要求12的方法，其中所述宿主細胞是枯草芽孢桿菌。

15.一種在芽孢桿菌屬中表達CALB的表達載體，其包含編碼CALB的核酸、用于在芽孢桿菌屬中復制的一個或多個復制起點、啟動子、分泌信號和任選的可選擇標記物。

16.權利要求15的表達載體，其中所述表達載體包含組成型啟動子。

17.一種表達系統，其包含權利要求15的表達載體、芽孢桿菌屬的宿主菌株和培養基。

18.一種培養基，其包含非碳水化合物微量營養素源、用于將所述培養基的pH維持在約5至約9范圍下的緩沖劑、不可水解的非離子表面活性劑和氮源。

19.權利要求18的培養基，其中所述培養基包含：

相對于所述組合物的總重量，約0.1%至約5%的非碳水化合物微量營養素源，

用于將pH維持在約6至約8下的緩沖劑，

相對于所述組合物的總重量，約0.01%至約1%的不可水解的非離子表面活性劑，

以及相對于所述組合物的總重量，約0.1%至約5%的氮源。