[發明專利]減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株及利用其的用于口服施用的疫苗組合物

在審

• 申請號: 201680077008.5
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN109790522A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 安東濬;任成仁;崔世恩;趙寅銹;鄭惠英;宋載永;金在炤;韓圭河;玄芳勛;金柄漢
• 申請（專利權）人: 大韓民國農林畜產食品部農林畜產檢疫本部
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;C12N15/85;A61K39/12;G01N33/569;G01N33/535;A61K39/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;趙赫

1.減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株，其特征在于，其為將豬瘟病毒疫苗株Flc-LOM-BErns進行細胞間交替連續培養而獲得的減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株，所述細胞間交替連續培養是依次在CPK細胞(克隆的豬腎細胞)、BK細胞(牛腎細胞)、PK細胞(豬腎細胞)及CPK細胞(克隆的豬腎細胞)中進行連續繼代培養。

2.根據權利要求1所述的減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株，其特征在于，所述豬瘟病毒疫苗株Flc-LOM-BErns是以保藏編號KCTC12304BP進行保藏的疫苗株。

3.根據權利要求1所述的減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株，其特征在于，所述標記活疫苗株具有1×10^6.0～1×10^7.0TCID₅₀/ml的效價。

4.根據權利要求1所述的減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株，其特征在于，所述標記活疫苗株是以保藏編號KCTC18431P進行保藏的疫苗株。

5.用于口服施用的豬瘟病毒疫苗組合物，其包含權利要求1至權利要求4中任意一項所述的減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株及藥劑學上可接受的載體。

6.根據權利要求5所述的用于口服施用的豬瘟病毒疫苗組合物，其特征在于，所述組合物劑型化為誘餌劑型。

7.制備減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株的方法，其包括下述步驟：

(a)將Flc-LOM-BErns疫苗株接種于CPK細胞(克隆的豬腎細胞)中，然后進行連續繼代培養，以增殖至具有1×10^3.0～1×10^4.0TCID₅₀/ml的效價；

(b)將所述步驟(a)中增殖的病毒再次接種于BK細胞(牛腎細胞)中，然后進行連續繼代培養，以增殖至具有1×10^4.0～1×10^5.0TCID₅₀/ml的效價；

(c)將所述步驟(b)中增殖的病毒再次接種于PK細胞(豬腎細胞)中，然后進行連續繼代培養，以增殖至具有1×10^5.0～1×10^6.0TCID₅₀/ml的效價；以及

(d)將所述步驟(c)中增殖的病毒再次接種于CPK細胞(克隆的豬腎細胞)中，然后進行連續繼代培養，以增殖至具有1×10^6.0～1×10^7.0TCID₅₀/ml的效價。

8.根據權利要求7所述的制備減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株的方法，其特征在于，實施各個所述步驟(a)～(d)之前，進一步包括確認及去除混入的菌、混入的病毒或它們的混合物的步驟。

9.根據權利要求8所述的制備減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株的方法，其特征在于，所述混入的菌為支原菌，所述混入的病毒為犬副流感病毒。

10.根據權利要求7所述的制備減毒的豬瘟病毒標記疫活苗株的方法，其特征在于，所述步驟(a)的Flc-LOM-BErns疫苗株是以保藏編號KCTC12304BP進行保藏的疫苗株。

11.根據權利要求7所述的制備減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株的方法，其特征在于，所述步驟(a)的連續繼代培養至少進行至增殖20代，所述步驟(b)的連續繼代培養至少進行至進一步增殖10代，所述步驟(c)的連續繼代培養至少進行至進一步增殖10代，所述步驟(d)的連續繼代培養至少進行至進一步增殖10代。

12.根據權利要求7所述的制備減毒的豬瘟病毒標記活疫苗株的方法，其特征在于，所述標記活疫苗株是以保藏編號KCTC18431P進行保藏的疫苗株。