[發明專利]用于基因編輯的組合物和方法

在審

• 申請號: 201680074820.2
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN109153990A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發明（設計）人: 沈嘯;韓春雨
• 申請（專利權）人: 浙江大學;河北科技大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/85;C12N15/86;C12N15/55;C12N9/22;C12N15/113
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種修飾靶核酸的方法，包括在約10℃至約60℃的溫度下使所述靶核酸與Argonaute(Ago)蛋白和單鏈引導DNA接觸，其中所述Ago蛋白和所述引導DNA形成特異性識別所述靶核酸中的靶基因座的復合物，并且其中所述靶基因座包含與所述引導DNA的序列互補的序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述Ago蛋白切割所述靶基因座。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述靶基因座是雙鏈DNA，并且其中所述Ago蛋白誘導所述靶基因座的雙鏈斷裂。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述溫度為約37℃。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述Ago蛋白和所述引導DNA存在于預形成的復合物中。

6.根據權利要求5所述的方法，其中在低于約50℃的溫度下所述引導DNA不與所述Ago蛋白解離。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述靶基因座的序列包含對所述引導DNA的序列的不超過約3個錯配。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述靶基因座具有至少約60％的GC含量。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述Ago蛋白來源于選自以下的生物體：格氏嗜鹽堿桿菌(Natronobacterium gregoryi)、銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)、Halogeometricum pallidum、亞洲嗜鹽堿桿菌(Natrialba asiatica)、西藏嗜鹽堿紅菌(Natronorubrum tibetense)、隱紅堿線菌(Natrinema pellirubrum)、伯林鹽幾何菌(Halogeometricum borinquense)、Thermococcus barophilus、嗜熱聚球藻(Thermosynechococcus elongatus)、嗜冷嗜鹽菌(Halorubrum lacusprofundi)、微囊藻屬(Microcystis sp.)、聚球藻屬(Synechococcus sp.)、梭菌屬(Clostridium bartlettii)、產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、煎盤梭菌(Clostridium sartagoforme)、梭菌屬(Clostridium sp.)、Intestinibacter bartlettii、嗜熱古菌(Ferroglobusplacidus)、鹽桿菌屬(Halobacterium sp.)、Methanocaldococcus fervens、淺黃假單胞菌(Pseudomonas luteola)、Thermogladius cellulolyticus、固氮弧菌屬物種(Aromatoleumaromaticum)、深海超嗜熱古菌(Thermococcus onnurineus)、坎式甲烷火菌(Methanopyruskandleri)、細長聚球藻(Synechococcus elongatus)、好熱黃無氧芽孢菌(Anoxybacillusflavithermus)、微小桿菌屬(Exiguobacterium sp.)、鞘絲藻屬(Lyngbya sp.)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、Halorubrum kocurii、Burkholderiaambifaria、草根圍伯克霍爾德氏菌(Burkholderia graminis)、死海鹽盒菌(Haloarcula marismortui)、百脈根中慢生根瘤菌(Mesorhizobium loti)、紅細菌目細菌(Rhodobacterales bacterium)和解肝磷酯土地桿菌(Pedobacter heparinus)。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述Ago蛋白來源于格氏嗜鹽堿桿菌。