[發明專利]用于誘導造血細胞分化的方法和組合物

有效

• 申請號: 201680073326.4
• 申請日: 2016-07-26
• 公開（公告）號: CN108473961B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發明（設計）人: B·瓦拉梅爾;R·克拉克;R·比喬戴爾
• 申請（專利權）人: 菲特治療公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12N5/0783;C12N5/0786;C12N5/0781;C12N5/078;C12N5/0787;C12N5/10;G01N33/569
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王永偉;趙蓉民

1.一種產生具有治療特性的造血譜系細胞的方法，包含：

a）獲得包含引入的一種或多種遺傳印記的誘導多能干細胞（iPSCs），其中所述一種或多種遺傳印記包括（i）編碼重組蛋白的序列的基因組插入，或（ii）使內源基因表達缺失或減少的基因組插入或缺失；和

b）引導所述iPSCs分化成造血譜系細胞，其中引導分化包含：

（i）使所述iPSCs與包含BMP路徑活化劑的組合物接觸，以獲得中胚層細胞；和

（ii）使所述中胚層細胞與包含BMP路徑活化劑、bFGF和WNT路徑活化劑的組合物接觸，以獲得具有永久性生血內皮細胞（HE）潛能的中胚層細胞，其中具有永久性生血內皮細胞（HE）潛能的所述中胚層細胞能夠提供造血譜系細胞；

其中所述中胚層細胞和具有永久性HE潛能的所述中胚層細胞是在步驟（b）（i）和（b）（ii）中獲得，而不形成類胚胎體；

其中所述造血譜系細胞包含永久性生血內皮細胞、造血干細胞（HSC）、造血多潛能祖細胞（MPP）、前T細胞祖細胞、前NK細胞祖細胞、T細胞祖細胞、NK細胞祖細胞、T細胞、NK細胞、NKT細胞或B細胞；和

其中所述造血譜系細胞保留引入并包含在所述iPSCs中的所述遺傳印記。

2.根據權利要求1所述的方法，其中：

（I）獲得步驟a）的包含引入的所述一種或多種遺傳印記的所述iPSCs包含：

a）通過在將非多能細胞重編程為所述iPSC期間或之后進行基因組編輯而將所述一種或多種遺傳印記引入所述iPSC中；或

b）如下將所述一種或多種遺傳印記引入所述iPSC：

i.獲得對供者、疾病或治療反應具有特異性的來源特異性免疫細胞，其中所述免疫細胞呈現能保留的治療屬性，并且其中所述免疫細胞包含所述一種或多種遺傳印記；和

ii.將所述來源特異性免疫細胞重編程為所述iPSC，其中所述iPSC包含引入的遺傳印記和所述來源特異性免疫細胞的能保留的治療屬性；

或，

（II）引導所述iPSCs分化成步驟b）的所述造血譜系細胞進一步包含：

使具有永久性HE潛能的所述中胚層細胞與包含bFGF和ROCK抑制劑的組合物接觸，以獲得永久性HE細胞，

或

（III）在步驟b）之前，使所述iPSCs與包含MEK抑制劑、GSK3抑制劑和ROCK抑制劑的組合物接觸，以接種和擴增所述iPSCs。

3.根據權利要求2所述的方法，進一步包括使（II）的所述永久性HE細胞與包含以下i的組合物接觸以獲得造血多潛能祖細胞（MPP），或與包含以下ii的組合物接觸以獲得前T細胞祖細胞、T細胞祖細胞和/或T細胞，或與包含以下iii的組合物接觸以獲得前NK細胞祖細胞、NK細胞祖細胞和/或NK細胞：

i. BMP活化劑、ROCK抑制劑和一種或多種生長因子和細胞因子，所述生長因子和細胞因子選自由以下組成的組：TPO、IL3、GMCSF、EPO、bFGF、VEGF、SCF、IL6、Flt3L和IL11；或

ii.選自由SCF、Flt3L和IL7組成的組的一種或多種生長因子和細胞因子；以及BMP活化劑、ROCK抑制劑、TPO、VEGF和bFGF中的一種或多種；或

iii.選自由SCF、Flt3L、TPO、IL7和IL15組成的組的一種或多種生長因子和細胞因子以及BMP活化劑、ROCK抑制劑、VEGF和bFGF中的一種或多種。